本站内容部分来自网络，部分由Louis原创，除用于商业用途外，你可以任意转载，但请注意标明出处。
如有某些内容侵犯了您的权利，请提醒我，我将尽快删除这些内容。
Saturday, June 20, 2009
Thursday, May 14, 2009
Monday, April 27, 2009
看到一篇超级搞笑的文章“人生哲理的数学表达式”
1 x 8 + 1 = 9
12 x 8 + 2 = 98
123 x 8 + 3 = 987
1234 x 8 + 4 = 9876
12345 x 8 + 5 = 98765
123456 x 8 + 6 = 987654
1234567 x 8 + 7 = 9876543
12345678 x 8 + 8 = 98765432
123456789 x 8 + 9 = 987654321
12 x 9 + 3 = 111
123 x 9 + 4 = 1111
1234 x 9 + 5 = 11111
12345 x 9 + 6 = 111111
123456 x 9 + 7 = 1111111
1234567 x 9 + 8 = 11111111
12345678 x 9 + 9 = 111111111
123456789 x 9 +10= 1111111111
98 x 9 + 6 = 888
987 x 9 + 5 = 8888
9876 x 9 + 4 = 88888
98765 x 9 + 3 = 888888
987654 x 9 + 2 = 8888888
9876543 x 9 + 1 = 88888888
98765432 x 9 + 0 = 888888888
1 x 1 = 1
11 x 11 = 121
111 x 111 = 12321
1111 x 1111 = 1234321
11111 x 11111 = 123454321
111111 x 111111 = 12345654321
1111111 x 1111111 = 1234567654321
11111111 x 11111111 = 123456787654321
111111111 x 111111111 = 12345678987654321
A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Y Z
8+1+18+4+23+15+18+11 = 98%
还有 知识 K-N-O-W-L-E-D-G-E
11+14+15+23+12+5+4+7+5 = 96%
1+20+20+9+20+21+4+5 = 100%
12+15+22+5+15+6+7+15+4 = 101%
and that God bless you!
Sunday, April 26, 2009
Thursday, April 23, 2009
80 后的毛病
以下80后十大烦恼的症候特征，看看你占了几条？
1.成天泡在网上，又不知道做什么好。
80后最常说的一句话是“无聊”，尽管他们在网络上聊天花去了大把的时间。
建议：聊天作为一种基本交流方式，所要达到的目的是获得认同。网上聊天很难达到这种认同，所以越聊越无聊。学习和工作累了，玩一玩游戏没错，但是打怪练级那些游戏基本上是得不偿失的。适量可以，过度的话，费时间，伤身体，还花钱。靠玩游戏来交流感情是不现实的，要交流感情最好还是找个人去咖啡吧，或者堡个电话粥吧。
2.浮躁，好预测未知妄下定论。
对看过的电影和电视剧，会按耐不住向别人透露下一个情节或者结局。对不了解的事物，根据一丁点信息发表长篇大论的见解，并且多半是批判的。对权威毫无理由的不耐烦，但绝不公开挑战，只热衷于影响身边的几个人，并有得到认同的强烈欲望。一旦不能如愿，就不再发言，部分人会暴跳如雷，令旁人费解。
建议：多出去旅行，多读书，多参加团体活动，多接触社会。世界的绝大部分真相在我们的视野之外，浮躁是个人修养浅薄的表现，人既是社会成员也是自然的组成部分，需要积淀对世界尽可能的多认识，才能达到意识的足够高度，才能让人看起来不那么浮躁。
3.瘦弱，不爱运动。
对健壮的人心存嘲讽，对肌肉和力量心存恐惧。在审美上受日式漫画的影响，崇尚中性美和病态美。与第一点有一定关系，在身体的耐力、韧性和爆发力上，更热衷于后者。但是在受到刺激之后，又会表现出病态的固执。这样就表现为两个极端，一方面弱不禁风，另一方面又偶尔会有惊人之举。
建议：健身，多进行户外运动。身体是人最接近自然的组成部分，一个健康强壮不容易被击倒的身体可以让我们终生收益。
4.性格软弱，喜欢为自己的意志不坚定找理由。
不喜欢通过沟通达到与外界的意见统一，而是表面妥协，内心强烈反感，表现为通常所说的叛逆。性格软弱表现在与异性相处方面就是易犯花痴，对异性的正常关怀想入非非。在弄清楚是怎么回事之后，即使真的喜欢对方，也不敢大胆追求，而是找个理由退缩。通常的理由是说自己不了解爱情，也不想了解。
建议：堂而皇之的与人打一架，正儿八经的谈一次恋爱。从自然法则的角度考虑的，与同性生物打架和向异性求爱都是走向成熟的标志。
5.消极，拒绝长大。
不喜欢被人说成熟，尤其不能容忍被人说是老男人或老女人。不耐烦与长辈讨论一些实际的问题，反感政治，厌恶参加长辈在场的应酬。要负责任的事情，会让他们觉得焦虑不安和无奈。
建议：尝试了解父母的不易。也可以从哲学层面去了解索取和付出之间的辩证关系，就象课本里所说的权利和义务的关系。
6.选择性自闭，对熟人唠叨不休，对陌生人一言不发。
偏爱使用方言或者网络语言等非大众语言。吸烟，但是不敬烟。喝酒，但是不敬酒。不是他们感兴趣的话题，基本上很难交谈下去。多人参与讨论时，如果没有人邀请他发言，即使他已酝酿好发言稿，还是会选择沉默。
建议：这些其实都是在沟通上遇到的困难。建议扩大知识面，扩大社交圈，改变与人交谈的方式，勇敢表达自己的见解，努力将自己的观点传达并影响其他人。获得认同后就会产生激励，反复几次，就可以走出自闭。
7.习惯熬夜，25岁之前通宵次数明显较多。
有时候为了“合理安排时间”，干脆用通宵来减少熬夜次数。实际上下半夜都在打瞌睡。
建议：熬夜其实就是自闭在作怪。有熬夜习惯的人，白天就找到了关门睡觉的理由，避免了外界的骚扰。或者白天虽然没有在家睡觉，因为精神上萎靡不振，能造成“外界不关我事”的错觉，也能达到抵制外界骚扰的目的。建议立刻改变作息时间，打开心扉。
8.毫无理由的高傲。
觉得别人不可能了解自己，并以此作为对别人不屑的理由。不愿意听别人的建议，也听不进。这种高傲连他们自己都不知道为什么。
建议：由于时代因素，80后的自尊更为脆弱，从心理上就更趋向于自我保护，表现为对外界不信任。建议多了解一些社会规则，不管在什么场合，只要你在规则之内，你就是安全的，可以自由表达自己的存在价值。
9.做事不按计划，讨厌按部就班，永远不知道钱花到哪里去了。
以同时看多部小说，多部漫画为荣。喜欢同时着手几件事，忙得焦头烂额是他们喜欢的状态，尽管这些事情只要合理安排是完全可以按部就班轻松完成的。
建议：欲速则不达这个道理就不用说了吧。学会制定计划，可以避免紧急情况下全面崩盘的风险。
10.不问问题，过于依赖搜索引擎。
多数人喜欢用搜索引擎思考，将搜索引擎作为自己的智囊。
建议：互联网确实给了我们许多方便，但是互联网上的东西很多都是未经考证，经不起推敲的。所以要避免犯错，这个地方正需要80后拿出怀疑精神来，不能依赖互联网而使自身的学习功能退化了。
Monday, April 20, 2009
ACECAD—DigiMemo手写版
这是一款相当优秀的手写版。
你只需要将它当作一般的文件夹，放入普通的纸张，用自带的笔来记录，你所写下的一切文字或者图画甚至涂鸦，都可以完美的保存为电子版。
更爽的是，你可以通过自带的软件，将你的笔记由图片格式变成word格式，包括图形：
有这么一个小玩意，完全就可以替代一般意义上的笔记本，并且能够把记录转换为电子格式，这样，通过onenote等等软件的管理，完全可以让所有手写的笔记电子化，并且有条理清晰的组织，甚至可以在电脑上迅速查找。
试想，当你想不起笔记中哪里记载了所需要的信息时，可以直接用关键词来搜索！这是多么让人兴奋的事情！
不过可惜了这么爽的好东西，在大陆市场上没有销售......只能海外代购。代购的话，那就价格不菲了......
哎，我慢慢攒钱吧～
Tuesday, April 7, 2009
开源难掩高成本 八大原因企业慎选Linux
微软和Sun的专有操作系统产品的成本可能要比红帽和 Novell的Linux产品成本低大约10%到100%，这取决于操作系统的配置和许可合同的长短。此结论比较适用于Windows Server 2003，Solaris 10以及Red Hat Enterprise Linux和SuSE Linux 。
现在，虽然Linux技术发展和普及的势头很迅猛，不过，仍然有一些企业坚持不使用Linux，他们的理由也很充分。以下就列举了其中的8个原因。
1.专利侵权
使用Linux操作系统极有可能会使用户在将来陷入专利侵权问题的牢笼，给用户带来无法量化的损失。比如微软就因为这个问题起诉过Linux厂商Novell和SuSE。
“如果某个企业用户想要部署Linux而是Windows或专有的Unix系统，那么这就是一个潜在的风险，” 企业管理协会（EMA）资深分析师Andi Mann说。EMA是一个独立的行业分析机构并且专门从事IT管理市场的咨询公司。
这种潜在风险造成的成本是不是能够足以使企业用户放弃使用Linux的念头呢？
2.Linux许可有可能成本更高
市场分析机构Yankee Group资深分析师Laura DiDio在自己的研究报告“微软、Sun反击Linux，力争让操作系统成本更低”中指出，微软和Sun的专有操作系统产品的成本可能要比红帽和 Novell的Linux产品成本低大约10%到100%，这取决于操作系统的配置和许可合同的长短。DiDio的结论比较适用于Windows Server 2003，Solaris 10以及Red Hat Enterprise Linux和SuSE Linux 。
3.内置/捆绑功能够大幅度节省资金
虽然，大多数Linux发行版也自带很多免费软件。但是，你花在专有操作系统上的钱绝对也令你物有所值---你可以得到数量非常众多、功能齐全的各种工具和服务。
DiDio指出，“如果你买了微软的软件保证（Software Assurance），你就需要支付一定的保费，但你同时也得到了很多东西。你可以获得免费培训。而且还能访问在线资产管理来跟踪许可，这样你就能避免买多或买少，这给你带来了巨大的方便。并且在家庭使用权方面你也可以获得较大的折扣。”
DiDio还表示，微软的软件保证即使对于只有10几个员工的小企业也绝对是物有所值，能够为它们节省数千美元，“而大型企业又可能会节省数百万美元。”
此外，DiDio还补充说：“经过改进的Windows补丁管理工具能够使网络管理员的工作效率大大提高---平均百分之五十至百分之八十左右，并且不会造成成本的增加。并且微软免费提供Windows服务器更新服务（WSUS）。而如果你选择Linux操作系统，那么你不得不将IT预算的百分之二十至百分之二十五用来购买第三方管理和性能优化工具，而这些工具已经包含在Windows许可中了。”
需要补充的是，Windows并不是唯一的Linux替代品。
如果你打算在服务器上使用虚拟化或类虚拟化的环境，“VMware的虚拟化技术往往会使每个服务器的每个CPU的成本增加一千美元或更多，” Sun公司Solaris营销部副总裁Marc Hamilton说。Hamilton还指出，包括Sun的Containers虚拟化设施不会增加任何额外费用。
4.Linux维护成本高 就购买成本而言， Linux操作系统通常会比专有操作系统要便宜。EMA的Mann在其“Linux管理的真相”中指出，Linux的购买费用---不包括支持费用--- 通常只有Windows的百分之十左右。例如，“对于一个有100个用户的网络应用环境，部署一个完全的Windows环境需要6万美元，而相应的开源软件只需要6千美元。” 但是，这并没有包括管理工具的成本。“在我看来，纯微软环境更易于管理，” Mann说。“这就是为什么比需要花大价钱购买Linux系统管理工具，没有管理工具，Linux环境是很难管理的，这是大家都公认的。” 如果你不擅长管理服务器环境或者如果你没有合适的管理工具，Windows将是一个更容易管理的系统而且成本也更低，Mann说。“软件发行管理、补丁管理……非Linux环境有很多更加先进的管理工具，特别是Windows操作系统，同时还有Unix和Solaris 。” Linux和Windows管理工具的成本从零到几十万美元不等，比如IBM Tivoli 或CA Unicenter。“但是，对于小型环境而言，比较便宜的工具完全能够胜任，” Mann说。 5.聘请Linux技术人员可能需要花费更多的钱 “现在，操作系统治持维护人员的知识遂平有一个显著的差异，”资深IT管理人员Chris de Herrera说。“Windows支持所需要的专业知识比较少，想比之下， Linux则需要很多。” Herrera说：“Windows的每一个应用程序都是已经预编译好的，所以一旦它们安装完毕，一般都能正常运行。而对于Linux操作系统而言，情况可能并非如此。另外再加上一些特殊要求，比如Linux 技术人员需要理解源代码管理和版本，一个例子就是DLL地狱。有些Linux应用程序需要一定版本的类库才能运行，这就有可能与其它应用程序冲突。” Herrera表示：“系统支持和维护人员经验的差异以初级开发人员为界，而不仅仅是做系统管理。另外，Linux安装升级的过程可能会有些复杂，这取决于使用的升级方法。如果你选择的应用不支持，那么你必须手动完成升级。” “企业使用Linux的前提条件是自己的IT员工对于Linux集成和基础设施必须相当熟悉，” ExtremeLabs公司总经理Tom Henderson说。 “如果你的IT技术人员对于Linux不是非常熟悉，那么你就需要对工作人员进行培训或者招聘一些具备这些技术的员工，” Henderson说。“经验丰富的Unix/Linux/HP-UX/Solaris 专业人员聘用价格往往那个非常高。” 6.使用非Linux的Unix可能是一个更好的选择 Linux是不是唯一能够运行在X86硬件上的非Windows操作系统，比如Sun公司的Solaris。这点很容易忘记 “与Linux发行版相比，Solaris的支持费用更低，”Hamilton说。“比如，Solaris 10的支持成本通常要比Red Hat Linux低百分之十至百分之五十或更多。” 造成这种现象的一个原因就是Solaris具有的一些特定功能，比如Solaris故障管理架构。如果出现一个内存DIMM失败，“Solaris 10操作系统将自动重新配置，而不需要重新启动。”虽然内存DIMM失败并不经常发生，“可是，如果你的网站有100或1000台服务器，那么你就不得不考虑这个问题，” Hamilton说。例如，如果你的远距离数据中心采用Linux操作系统，并且有200台服务器，“这可能意味着你将每天都要派出技术人员修复这个错误。” 7.硬件支持问题 “Linux对于硬件和驱动器的支持问题也应该引起注意，而Windows通常没有这方面的问题”Mann说。 “硬件兼容性问题并不是Linux独有的，”开源分析公司Red Monk 首席分析师Stephen O‘Grady指出。 Linux对于硬件的支持正在变得越来越好。但是仍然存在一些问题，尤其是在桌面上。 “Linux有可能缺少最常见设备的驱动支持，比如信用卡刷卡机或销售点终端机，这可能会让你额外支付很大一笔费用。” IndependentAssessment 分析师Alan Radding说 8.向Linux迁移成本过高 当然，Linux的总体拥有成本当然还包括迁移成本。 “关键应用的转换成本可能会很高，比如Microsoft Exchange Server，因为建立在Exchange之上的电子邮件、服务和应用都需要更换、修改或修复，” Henderson指出。 应用可用性也是一个值得关注的问题，O‘Grady指出。“有很多应用软件只支持Windows服务器或桌面。比如，像QuickBooks这样实用的软件却不能运行在Linux平台上。”微软和Sun的专有操作系统产品的成本可能要比红帽和 Novell的Linux产品成本低大约10%到100%，这取决于操作系统的配置和许可合同的长短。此结论比较适用于Windows Server 2003，Solaris 10以及Red Hat Enterprise Linux和SuSE Linux 。微软和Sun的专有操作系统产品的成本可能要比红帽和 Novell的Linux产品成本低大约10%到100%，这取决于操作系统的配置和许可合同的长短。此结论比较适用于Windows Server 2003，Solaris 10以及Red Hat Enterprise Linux和SuSE Linux 。
Saturday, April 4, 2009
NBA历史至今的四双数据
内特·瑟蒙德，22分、14个篮板、13次助攻、12次盖帽，1974年10月18日公牛vs老鹰
埃尔文·罗伯特森，20分、11篮板、10助攻、10抢断（联盟历史上惟一一个由抢断构成的“四双”），1986年2月18日马刺vs太阳
奥拉朱旺，18分、16个篮板、10次助攻、11次盖帽，1990年3月29日火箭vs雄鹿
大卫·罗宾逊，34分、10个篮板、10次助攻、10次盖帽，1994年2月17日马刺vs活塞
Wednesday, April 1, 2009
Be in a puzzle about “You jump,I jump”
“You jump,I jump” 参见《泰坦尼克号》，既《Titanic》
——题记
我一直不明白，为什么是“You jump,I jump”，也就是说，“I jump”的前提是“You jump”？
为什么要有这个前提？
google账户的语言设置
怎样改变我的账户(My Account)和其他一些产品(Gmail等)的界面语言？
部分 Google Web Application 可以单独设置界面语言，如 Analytics, Gmail。但是 Google Account 控制面板和其他一些产品，如 Notebook 并没有提供设置界面语言的选项，但是我们仍然可以修改其语言，只须在访问的时候带上 hl (Help Language) 参数即可。对于部分产品，只须设置一次即可。
设置界面语言为简体中文：
Set help language as English(United States)
Monday, March 30, 2009
PCR引物设计zz
设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。引物分析软件将试图通过使用每一引物设计变化的预定值在这两个目标间取得平衡。设计引用有一些需要注意的基本原理：
① 引物长度
一般引物长度为18~30碱基。总的说来，决定引物退火温度（Tm值）最重要的因素就是引物的长度。有以下公式可以用于粗略计算引物的退火温度。
在引物长度小于20bp时：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃
在引物长度大于20bp时：62.3℃+0.41℃(%G-C)-500/length-5℃
另外有许多软件也可以对退火温度进行计算，其计算原理会各有不同，因此有时计算出的数值可能会有少量差距。为了优化PCR反应，使用确保退火温度不低于54℃的最短的引物可获得最好的效率和特异性。
总的说来，每增加一个核苷酸引物特异性提高4倍，这样，大多数应用的最短引物长度为18个核苷酸。引物长度的上限并不很重要，主要与反应效率有关。由于熵的原因，引物越长，它退火结合到靶DNA上形成供DNA聚合酶结合的稳定双链模板的速率越小。
② GC含量
一般引物序列中G+C含量一般为40%~60%，一对引物的GC含量和Tm值应该协调。若是引物存在严重的GC倾向或AT倾向则可以在引物5’端加适量的A、T或G、C尾巴。
③ 退火温度
退火温度需要比解链温度低5℃，如果引物碱基数较少，可以适当提高退火温度，这样可以使PCR的特异性增加；如果碱基数较多，那么可以适当减低退火温度，是DNA双链结合。一对引物的退火温度相差4℃～6℃不会影响PCR的产率，但是理想情况下一对引物的退火温度是一样的，可以在55℃～75℃间变化。
④ 避免扩增模板的二级结构区域
选择扩增片段时最好避开模板的二级结构区域。用有关计算机软件可以预测估计目的片段的稳定二级结构，有助于选择模板。实验表明，待扩区域自由能（△G）小于58.6lkJ/mol时，扩增往往不能成功。若不能避开这一区域时，用7-deaza-2’-脱氧GTP取代dGTP对扩增的成功是有帮助的。
⑤ 与靶DNA的错配
当被扩增的靶DNA序列较大的时候，一个引物就有可能与靶DNA的多个地方结合，造成结果中有多个条带出现。这个时候有必要先使用BLAST软件进行检测，网址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/。选择Align two sequences (bl2seq).
⑥ 引物末端
引物3’端是延伸开始的地方，因此要防止错配就从这里开始。3’端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。3′端也不能有形成任何二级结构可能，除在特殊的PCR（AS-PCR）反应中，引物3′端不能发生错配。如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增特异性与效率。
⑦ 引物的二级结构
引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构，这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。若用人工判断，引物自身连续互补碱基不能大于3bp。两引物之间不应该存在互补性，尤应避免3′端的互补重叠以防引物二聚体的形成。一般情况下，一对引物间不应多于4个连续碱基的同源性或互补性。
⑧ 为了下一步操作而产生的不完全匹配
5’端对扩增特异性影响不大，因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5′端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入突变位点、插入与缺失突变序列和引入一启动子序列等。额外的碱基或多或少会影响扩增的效率，还加大引物二聚体形成的几率，但是为了下一步的操作就要作出适当的“牺牲”。
很多时候PCR只是初步克隆，之后我们还需要将目的片段亚克隆到各种载体上，那么就需要在PCR这个步骤为下一步的操作设计额外的碱基。以下总结一些为了亚克隆所要设计的序列。
a 添加限制性内切酶酶切位点
添加酶切位点是将PCR产物进行亚克隆使用得最多的手段。一般酶切位点是六个碱基，另外在酶切位点的5’端还需要加2～3个保护碱基。但是不同的酶需要的保护碱基数目是不相同的，例如：SalⅠ不需要保护碱基，EcoRⅤ需要1个，NotⅠ需要2个，Hind Ⅲ 3个。其中，在原核表达设计引物时还有一些小技巧，大家可以参考：《原核表达之实验前的分析》。里面一些规则是所有表达都通用的。
有一种做法是在进行PCR反应的同时进行酶切，这样就需要注意一些内切酶在PCR反应中的酶切反应率，见附录。不过这种方法虽然方便但并不推荐。有时候，就是把PCR产物回收后酶切再与载体连接效果都不尽理想，同步进行会使出现问题的原因变得更加复杂。一旦出现问题，分析起来更麻烦。
b LIC添加尾巴
LIC的全称是Ligation-Independent cloning，它是Navogen公司专门为其部分的pET载体而发明的一种克隆方法。用LIC 法制备的pET 载体有不互补的12–15 碱基单链粘端，与目的插入片段上相应粘端互补。扩增目的插入片段的引物5'序列要与LIC载体互补。T4 DNA 聚合酶的3'→5'外切活性经短时间即可在插入片段上形成单链粘端。由于只能由制备好的插入片段和载体互相退火形成产物，这种方法非常快速高效，而且为定向克隆。
c 定向TA克隆添加尾巴
在T载体刚出的时候大家都拍手称赞，真是方便，哪个小子脑子这么聪明想出来的。但是后来人们发现TA克隆无法将片段定向克隆到载体中，所以后来Invitrogen推出了可以定向克隆的载体，它的一端含有四个突出的碱基GTGG。因此在PCR引物设计时也要相应的加上与之互补的序列，这样片段就可以“有方向”了。
d In-Fusion克隆方法
这项技术是Clontech还属于BD的时候推出的，2004年在生物通可着实风光了一把，不但当选年度创新试剂还被大家投票为最受大家欢迎的试剂。此技术就其步骤来说是及其方便的，不需连接酶，不需长时间的反应。只要在设计引物的时候引入一段线性化载体两端的序列，然后将PCR产物和线性化的载体加入到含有BSA的In-Fusion酶溶液中，在室温下放置半个小时就可以进行转化了。这种方法特别适合大批量的转化。
这里顺便提一下如果有什么技术给大家留下深刻影响，欢迎大家发email推荐给生物通。说不定你的推荐可以让它成为年度之星呢。
如果要加入额外的碱基总是或多或少会影响到整个PCR反应，比如在加入NotⅠ的酶切位点后整个引物的退火温度就会直线上升（它识别的是8个碱基，且全为GC），这样使另外一个引物的设计变得十分困难，因为一对引物间退火温度相差不宜太远。因此上面提到许多设计原则在实际应用中往往难以做到都符合。在碰到这些情况的时候，我们只能秉着“实践是检验真理的唯一标准”这一原则，要试一试才能知道能否行得通了。
Saturday, March 7, 2009
绿巨人《The Incredible Hulk》——有力量并不难
这个绿巨人，也许叫做无敌浩克更为贴切一些，比起五年前绿色巨人的另外一个版本，要精彩很多，恩，还是不要弄混的比较好。
故事中国防部召集的科学家们，本想利用生化的方法加强人体的战斗力，以期得到超级大兵，却在一个意外中改变了科学家Bruce Banner，或者说创造了神奇的绿色巨人——浩克。
实际上，浩克的诞生是两个科学家的成果——遗传学家Bruce Banner，还有他的女友——细胞生物学家Betty Ross，看起来，拥有这种绿色的神奇力量不是太难，只需要一名做细胞研究的遗传学家，恩，差不多就够了。
后来浩克遇到了很大的问题，他无法控制自己在浩克和Bruce Banner之间的转换，而且在神奇绿巨人的状态下，似乎也没有理智，只有类似低等动物的自我保护和反击的本能。直到发现他的女友拥有能够让他平静下来的另一种力量，我更倾向于是爱情的力量，恩，爱情并不总是让人心潮澎湃，有时候，也能够让失去理智的人，平静下来。
片尾，浩克，或者说Bruce Banner，在加拿大的温带针叶林里，潜心修行，终于能够控制自己的变化和巨大的力量，完成了对自己的救赎。
Bruce Banner一定认为，有力量并不难，困难的是，如何收放自如。
Wednesday, March 4, 2009
LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤
24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染实验步骤：
（在生长培养基中直接加入复合物）
1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，将细胞转至24孔板，控制密度使其在转染日密度接近90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2.对于每孔细胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培养基稀释1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000试剂。温柔混匀LIPOFECTAMINE 2000，室温温浴5分钟
（在5-25分钟内同稀释的DNA混合。保温时间过长会降低活性。可以批量制备。）
注意：即使LIPOFECTAMINE 2000使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用D-MEM培养。
3.对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。多孔操作可以批量制备。
4.混合稀释的DNA（由第3步）和稀释的LIPOFECTAMINE 2000（由第2步）。在室温保温20分钟。 注意：溶液可能会混浊，但不会影响转染。复合物可以在室温保持6小时稳定。
5.直接将复合物（100μl）加入到每孔中，前后（或左右）摇动培养板，轻轻混匀。
注意：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为0.2ml无血清培养基。
6.在37℃，5％的CO2中保温18-48小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。
7.在细胞中加入复合物18-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中（1：10），两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
（根据个人实验经验有所改动，感谢翻译说明书的原文作者）
Subscribe to:
Comments (Atom)