心动的足迹

你缺乏维生素D么？

2010-12-03T23:05:00.000+08:00

# VanMae 童鞋翻译了一幅图，原图在这里

隐蔽青年们注意了，尤其是居住在北纬42度以北的同学，有空出去晒晒太阳吧。因为缺乏维生素D会让你骨头脆、心脑得病，还可能患癌……

另：美国国家医学院11月30日发布了2010年的钙与维D摄取参考报告。可在这里下载全文或摘要。

简易摄影教程：如何拍火焰蝙蝠侠转自煎蛋

2010-07-15T00:04:00.001+08:00

1、准备好有B门的相机、神仙棒、三脚架、快门无线遥控器(如果有罗宾帮你就不需要这个)，还要想好蝙蝠是怎样的。
2、选好时间(建议在晚上，效果比较突出)。把相机架起来，再用相机目测好位置(画面中间的位置)。
3、按下快门，摆好 pose，定住4-5秒，然后点燃神仙棒开始画蝙蝠吧！画好后再松开快门就ok了。

不懂？看图

混乱三千年 v1.00

2010-07-10T12:00:00.000+08:00

看视频

你可能没见过的 10+ 漂亮 Chrome 主题

2010-07-09T23:39:00.002+08:00

转载自chrome迷
如果你觉得你的 Chrome 浏览器不够个性，可能首先想到的就是给它换一套主题皮肤。Google 官方虽然推出了 Chrome 的主题画廊网站，但只收录了 Google 创建的以及来自合作艺术家创建的主题，也许没有能够令你满意的，怎么办呢？其实，有很多第三方爱好者也制作了大量的 Chrome 主题。

很多爱好者自己制作的主题都被上传到了 Chrome 官方扩展中心，你可以在 Chrome 官方扩展中心搜索 theme，就可以找到不少漂亮的 Chrome 主题，我们希望 Google 能够在官方的主题画廊网站新增一个“由用户提交”的分类，让这些第三方爱好者可以上传自己制作的主题到官方主题画廊。

另外，你还可以通过 deviantART 和 ChromeThemes.org 网站找到很多漂亮的 Chrome 主题。下面我们一起来看看这些你可能没见过的漂亮 Chrome 主题：

Robot Theme

Foxy Theme

The Simpsons Theme

BioShock 2

XP Royale Blue 和 Zune Themes

Muku

Elegante

Green Day: Warning

Nightmare Before Christmas 和 Alice In Wonderland

Runescape

Via Download Squad
"

Gmail 终于可以用富文本做签名了

2010-07-09T18:09:00.001+08:00

转自谷奥

富文本签名一直是Gmail用户强烈呼吁的功能，有些人则通过油猴脚本、浏览器插件甚至是Labs里的Canned Responses来实现。现在这些通通不需要了，Gmail终于支持了富文本签名，签名设置的地方已经被一个富文本编辑器所取代，你可以随心所欲的加图片、链接、改字号、改颜色。

除此之外你还可以为不同发信人设置不同的签名，做一个人格分裂的你。

目前只有桌面版的Gmail支持富文本签名和多签名的选择，如果你在使用老HTML版的Gmail或是移动版的Gmail，都只能继续使用纯文本版的老签名。

Remember The Milk十分好用的任务管理服务转载

2010-07-08T09:52:00.004+08:00

Remember The Milk

想要在网上找一款强大的，又支持中文的GTD系统并不是件容易的事，而Remember the Milk却是其中一个特例。PC World对它作出了很高的评价：“Remember The Milk 重造了任务列表”。不过确实如此！优秀的Remember The Milk除了自身平台的强大，还有很广的扩展能力，它支持Google Calendar，Twitter，iPhone/iPod Touch，Gmail和Blackberry（黑莓手机）。

点击图标下载

我一直坚持认为，PC+Cellphone+Web（个人电脑+移动电话+网络）三位一体的组合，是互联网未来发展的大势所趋。PC/MAC个人电脑便于打字编排，移动电话便于随时随地Check and click（检查和点击完成），网络化更是Web 2.0时代注重互动的体现，不仅可以及时备份用户的数据，还可以让团队成员不受地域时间的限制而同步协作管理项目。而GTD，更是PC+Cellphone+Web组合的应用典范。

GTD，英文全称Getting Thing Done，由David Allen提出的行为管理理论。GTD的主要原则，是一个人需要通过记录的方式把头脑中的各种任务移出来。通过这样的方式，头脑不用塞满各种需要完成的事情，而集中精力在正在完成的事情。

GTD分为五个步骤：

Collect 收集
将我们需要做的和想做的事情，都记录在Inbox 收件箱。
↓
Process 分析
分析任务属于哪种情况：
（1）2分钟可以完成的立即去做；（2）是否需要联系某人去做；（3）需要指定时间，详细计划去完成。
↓
Organize 组织
给任务添加context上下文、tag标签、due date到期时间、note笔记；
任务需要分多个阶段去完成的，就创建project项目来管理多个task任务。
↓
Review 回顾
回顾所有新建的的任务、项目和等待完成的事情，确保每一件新建的任务都有很好的安排。
回顾所有已完成的任务、项目，总结经验，以斟因果得失。
↓
Do 行动
按照自己的计划去完成任务、项目。

可以免费注册使用的Remember The Milk包括了以下一些功能：

简单快捷地管理日常任务

设计优良的界面让管理待办事务更加愉快，你甚至可以使用类似下周五或两周内来定义事务到期时间。当然也可以使用键盘快捷方式加速您的日程管理。

无处不在的提醒

通过电邮、短信和即时通讯软件（支持AIM, Gadu-Gadu, Google Talk, ICQ, Jabber, MSN, Skype 和 Yahoo! ）接收提醒。

按自己的方式管理信息

你可以根据需要创建任意多个列表。所有事件都可以定义标签，并且可以通过“标签云”看到需要待办的事务。另外，你也可以针对事件创建便签记事。

定位自己的任务

使用地图来查看你的任务在现实世界所处的地点，查看他们是否就在附近，并且有计划的以最佳方式完成任务。

协作模式

通过你的联络对象或整个世界分享、邮寄和发布任务与列表。

无论何时何地添加任务

添加任务像发送一封邮件（甚至是打电话）一样简单。在网上查看一个重要的约会？用快速添加项将它添加到你的列表中。

随时随地访问你的待办事务

用你支持web的手机来查看任务。打印表现未来工作的整个列表或者一份星期计划手册。用Apple iCal或者Google Calendar在你的日历中查看工作。订阅使用Atom/RSS的feeds。

分配自己的时间

看看今明两天该做的事与你错过未做的事情。设定其为优先，估计你的时间并作适当的推迟。设定每周重复的事情或者两个月后还要做的事情。

智能搜索

Remember The Milk提供了高级搜索功能来帮助查找事件。你可以将搜索保存成为智能列表，方便以后查看。

通过邮件更新 Twitter 的 10 种方式

2010-07-04T10:45:00.002+08:00

更新 Twitter 的方法相当多，例如，你可以访问 Twitter 网站、使用 Brizzly 等在线应用工具、安装TweetDeck 等桌面软件、等等。

在这么多的方法里面，通过邮件更新 Twitter 也是很有趣很简单的，因为不管你是用电脑、上网本还是手机，只要能上网就行。以下 10 个网站所提供的服务将会让你通过邮件把文本、图片、视频或者其他格式的文件免费分享到 Twitter。

一、通过邮件分享文本到 Twitter

以下三个网站可以让你通过邮件发送文本到 Twitter：

1. Tweetymail 主要推荐

通过 Twitter 帐号登录 Tweety Mail (免费版)并关联你的邮箱地址，然后你发到tweet@tweetymail.com 的邮件就会自动分享到 Twitter。

TweetyMail是一个通过Email来使用Twitter的解决方案，使用Oauth方式登录。

具备如下功能：
通过Email来发布及获取Twitter消息。
通过Email来回复及DM Twitter消息（开发中）。
通过Email来进行Follow, block, 或 unfollow 操作。
自动使用TinyURL或 Bit.ly来生成短网址。
完全支持中文。
使用方法：
消息发布：发送邮件到 tweet@tweetymail.com ，主题和邮件正文会合并作为Tweet消息。
获取最新消息。发送邮件到 latest@tweetymail.com ，主题和邮件正文都为空的话，就获取你所有好友的消息。
另外 follow@tweetymail.com 、block@tweetymail.com 、unfollow@tweetymail.com则用于进行Follow, block, 或 unfollow 操作。
更多及详细使用方法详见这里 http://tweetymail.com/userguide

除此之外，你还可以通过发邮件到其他 Tweety Mail 邮箱，然后接收朋友的信息、别人的回复或者搜索的结果。

2. TweetByMail

通过 Twitter 帐号登录 TweetByMail 网站之后，你就会得到一个邮件地址，所有发到该邮箱的文本内容都会被分享到 Twitter。

3. Tweetc

如果要发表超过 140 个字符的信息到 Twitter，你可以尝试 Tweetc。

通过 Twitter 帐号登录之后，你就可以在设置页面看到 Tweetc 指定的邮件地址，例如：

freenuts.5dn3oolh@tweetc-app.appspotmail.com

所有发到那个邮件地址的文本内容都会被自动分享到 Twitter。

二、通过邮件分享图片到 Twitter

以下三个网站可以让你通过邮件分享图片到 Twitter:

4. Flickr

将你的 Twitter 帐户作为一个博客添加到 Flickr 网站上，然后你就可以把图片发到该网站指定的邮箱并分享到 Twitter。

5. Twitpic

通过 Twitter OAuth 登录 Twitpic 网站，然后你就可以把图片发到该网站指定的邮箱并分享到 Twitter。

6. Yfrog

通过 Twitter 帐户登录之后，你就可以把图片发到 yfrog 网站指定的邮箱并分享到 Twitter。

三、通过邮件分享视频到 Twitter

以下两个网站可以让你通过邮件分享视频到 Twitter:

7. 12seconds

通过 Twitter 帐号登录 12seconds 网站，然后你就可以把视频发到该网站指定的邮箱并同步到 Twitter。

8. YouTube

在“活动共享”页面关联你的 Twitter 帐户之后，你就可以通过邮件把视频上传到 YouTube 网站并分享到 Twitter。

四、通过邮件分享多种格式文件到 Twitter

以下两个网站可以让你通过邮件分享文本、图片、视频或者其他格式的文件到 Twitter:

9. Posterous

在 Posterous 网站上创建一个帐号并关联到你的 Twitter 帐户，然后你就可以通过邮件上传任何文件到该网站并分享到 Twitter。

10. Mobypicture

通过 Twitter 帐号登录 Mobypicture 网站之后，你就可以通过邮件发送文本、图片或者音频文件到该网站并分享到 Twitter。

转载自精品博客

bioinformatics生物信息学软件Geneious 中关于alignment比对的相关参数解释

2010-06-30T22:52:00.002+08:00

Needleman-Wunsch，PAM250、BLOSUM62、BLOSUM90、BLOSUM30，CLUSTALW，在geneious的比对参数里面有很多这样那样的设置，那么，他们是什么含义，我们应该怎样设置呢？

以下是相关解释
Needleman-Wunsch算法：
是针对寻求最佳序列比对这一问题所设计的动态规划寻优策略（Needleman and Wunsch,1970）。动态规划的思想是这样的，如果一条路径终止于最佳路径上的一点，那么这条路径本身就是起点到这个中间点的最佳路径，也就是说，任何一个终止于最佳路径上的一点的次级路径必然就是终止于这一点的最佳路径本身。这样，最佳路径就可以通过把各个最佳的次级路径连接而成。在基本的Needleman-Wunsch公式表达中，最佳比对必然对每个序列都由始至终，就是说从搜索空间的左上角直至右下角。换句话说,它搜索全程比对。
然而，对这种基本策略稍作修改就可以实现最佳的局部比对。这种比对的路径不需要到达搜索图的尽头，只需要在内部开始和终结。如果某种比对的打分值不会因为增加或减少比对队的数量而增加时，这种比对就是最佳的。这个过程依赖于打分系统的性质，就是说某种路径的打分会在不匹配的序列段位置减少（以下叙述的打分系统合乎这个标准）。当分值降为零时，路径的延展将会终止，一个新的路径就会应运而生。这样，我们会得到许多独立的路径，它们以不匹配的序列段为界限而不是像在全程比对中以序列的结尾作为界限。在这些路径中，拥有最高分的一个就是最佳的局部比对。
应该意识到，寻优方法总是把最佳的比对方法表达出来，而不在意它是否具有生物学意义，另一方面，寻求局部比对时可能会发现若干个重要的比对，因此，不能仅仅注意最佳的一个。改良的Smith-Waterman(Altschul and Erickson,1986;Waterman and Eggert,1987)算法把寻找K种最好的但不相互交叉的比对方式最为目标，这些思想后来都在SIM算法(Huang et al.,1990)的发展中得以体现。一个名叫LALIGN（在FASTA程序包中）的程序提供了有用的SIM工具(Pearson,1996)。对于比对多模块的蛋白质而言，寻找次优比对尤为重要。

PAM和BLOSUM
在进行序列两两比对时，有两方面问题直接影响相似性分值：取代矩阵和空位罚分。粗糙的比对方法仅仅用相同/不同来描述两个残基的关系，显然这种方法无法描述残基取代对结构和功能的不同影响效果，缬氨酸对异亮氨酸的取代与谷氨酸对异亮氨酸的取代应该给予不同的打分。因此如果用一个取代矩阵来描述氨基酸残基两两取代的分值会大大提高比对的敏感性和生物学意义。虽然针对不同的研究目标和对象应该构建适宜的取代矩阵，但国际上常用的取代矩阵有PAM和BLOSUM等，它们来源于不同的构建方法和不同的参数选择，包括PAM250、BLOSUM62、BLOSUM90、BLOSUM30等。对于不同的对象可以采用不同的取代矩阵以获得更多信息，例如对同源性较高的序列可以采用BLOSUM90矩阵，而对同源性较低的序列可采用BLOSUM30矩阵

详细的说，在比较蛋白质时，我们可以用取代矩阵来增强弱势比对的敏感性。很显然，在相关蛋白质之间，某些氨基酸可以很容易地相互取代而不用改变它们的生理生化性质，这些保守取代的例子包括异亮氨酸（isoleucine）和颉氨酸（valin）（体积小，疏水），丝氨酸（serine）和苏氨酸（threonin）（极性）。在计算比对分之时，相同的氨基酸打分会高于取代的氨基酸，而保守的取代打分高于非保守变化，换句话说，设计了一系列的分值，而且，在比对非常相近的序列（mouse和rat的同源基因）以及差异极大的序列（mouse和 yeast的基因）时会设计出不同系统的分值，考虑到这些因素，使用取代矩阵会极为有利，在这个矩阵中，任何氨基酸配对的分值会一目了然。
第一个广泛使用的最优矩阵建立在进化的点突变模型上（PAM）（Dayhoff et al.,1978）。一个PAM就是一个进化的变异单位即1%的氨基酸改变，这并不意味着经过100次PAM后，每个氨基酸都发生变化，因为其中一些位置可能会经过多次改变，甚至可能变回到原先的氨基酸，因此另外一些氨基酸可能不发生改变。如果这些变化是随机的，那么每一种可能的取代频率仅仅取决于不同氨基酸的出现的频率（称为背景频率）。然而，在相关蛋白中，已经发现的取代频率（称为目标频率）大大地倾向于那些不影响蛋白质功能的取代，换句话说，这些点突变已经被进化所接受。Dayhoff同合作者们第一次使用了log-odd处理，在这种处理中，矩阵中的取代分值同目标频率于背景频率的比值的自然对数成比例。为了评估目标频率，人们用非常相近的序列（比对时不需要取代矩阵）来收集对应于一个PAM的突变频率，然后将数据外推至250个PAM，PAM250矩阵结果如图7.7。虽然Dayhoff等人只发表了PAM250，但潜在的突变数据可以外推至其它PAM值，产生一组矩阵，在比较差异极大的序列时，通常在较高的PAM值处得到最佳结果，比如在PAM200到250之间，较低值的PAM矩阵一般使用于高度相似的序列（Altschul,1991）。

用同样方式建立了BLOSUM取代矩阵，但在评估目标频率时，应用了不同的策略，基本数据来源于BLOCKS数据库，其中包括了局部多重比对（包含较远的相关序列，同在PAM中使用较近的相关序列相反）。虽然在这种情况下，没有进化模型，但它的优点在于可以通过直接观察获得数据而不是通过外推获得。同PAM模型一样，也有许多编号的BLOSUM矩阵，这里的编号指的是序列可能相同的最高水平，并且同模型保持独立性。举例来说，如图7.8所示的BLOSUM的矩阵，至少有62%的相同比例的序列被组合成一个序列，因此取代频率更加受到那些比空位变化还大的序列的极大影响，取代矩阵在处理高度相似序列时使用高的阈值（直至BLOSUM90），处理差异大的序列时使用低的阈值（直至BLOSUM30）。

PAM和BLOSUM之间的区别

PAM矩阵根据一个明确演变模型(即替换在一棵种系发生的树的分支计数)，而BLOSUM矩阵根据演变一个含蓄模型。
PAM矩阵根据变化被观察在全球性对准线中，这包括高度被保存的和高度可变的地区。 BLOSUM矩阵根据高度被保存的地区仅参加一系列禁止的对准线包含空白。
使用的方法计数替换是不同的：不同于PAM矩阵， BLOSUM做法使用之内不是所有的变化计数同样的小组序列在。
而大数在BLOSUM矩阵命名计划表示更高的序列相似性并且更小的演变距离，高数量在PAM矩阵命名计划表示更大的演变距离。例子： PAM150为更加遥远的序列比PAM100使用; BLOSUM62为更加接近的序列比Blosum50使用。
有观点认为，PAM模型可用于寻找蛋白质的进化起源，而BLOSUM模型用于发现蛋白质的保守域。

多序列比对的方法选择

顾名思义，多序列比对就是把两条以上可能有系统进化关系的序列进行比对的方法。目前对多序列比对的研究还在不断前进中，现有的大多数算法都基于渐进的比对的思想，在序列两两比对的基础上逐步优化多序列比对的结果。进行多序列比对后可以对比对结果进行进一步处理，例如构建序列模式的profile，将序列聚类构建分子进化树等等。

目前使用最广泛的多序列比对程序是CLUSTALW(它的PC版本是CLUSTALX)。CLUSTALW是一种渐进的比对方法，先将多个序列两两比对构建距离矩阵，反应序列之间两两关系；然后根据距离矩阵计算产生系统进化指导树，对关系密切的序列进行加权；然后从最紧密的两条序列开始，逐步引入临近的序列并不断重新构建比对，直到所有序列都被加入为止。

CLUSTALW的程序可以自由使用，在NCBI的FTP服务器上可以找到下载的软件包。CLUSTALW程序用选项单逐步指导用户进行操作，用户可根据需要选择打分矩阵、设置空位罚分等。EBI的主页还提供了基于Web的CLUSTALW服务，用户可以把序列和各种要求通过表单提交到服务器上，服务器把计算的结果用Email返回用户。

CLUSTALW对输入序列的格式比较灵活，可以是前面介绍过的FASTA格式，还可以是PIR、SWISS-PROT、GDE、Clustal、GCG/MSF、RSF等格式。输出格式也可以选择，有ALN、GCG、PHYLIP和GDE等，用户可以根据自己的需要选择合适的输出格式。

用CLUSTALW得到的多序列比对结果中，所有序列排列在一起，并以特定的符号代表各个位点上残基的保守性，“*”号表示保守性极高的残基位点；“.”号代表保守性略低的残基位点。

我认为，在多序列比对中，geneious的比对不如clustal严谨（也可能是我参数设置的问题）。寻找同源区域时没有显著差别，但是构建进化树时，强烈建议使用clustal作为比对工具。

用GappProxy搭建google个人代理（转载）

2010-06-25T00:33:00.004+08:00

出于快速寻找国际信息的目的，一款好的代理会让我们工作免受网络速度影响，更有效率。

这是一款名为GAppProxy的代理服务器，与其他代理服务器相比，至少有三大优点。首先，
GAppProxy是基本Google App Engine的，架设方便、长期存在，不用再隔天换代理IP了；
其次，冲着Google的名气，稳定有保证；最后，正因为Google服务器遍布全世界，所以
GAppProxy跑起来的速度相当快速。软件的介绍和下载地址见：
http://code.google.com/p/gappproxy（上不去的用可用在线代理）

GAppProxy是一个完整的Proxy解决方案：与常见的HTTP Proxy不同，GAppProxy运行在
Google App Engine上，不需要专门的服务器，只要一个客户端即可使用Google无限
的资源。GappProxy默认的是公用的代理服务器，用户多速度也一般。今天讲搭建Google
App Engine个人代理服务器的具体实现，主要是搭建个人的Proxy，自己管理和使用，
速度优于公共的Fetch Server，同时更不容易被封。下面将完整的介绍怎样搭建自己的
Fetch Server,以及如何使用的过程。主要是申请Google App Engine账户，上传
GAppProxy源代码，配置浏览器端代理，三大步！懂的，可以略过。

1.申请一个Google App Engine帐号，开启一个应用

到Google App Engine申请一个帐号，在右边填入自己的Google帐号，密码，即可以进入：

进到里面后点击下面的那个Create An Application按钮打开新页面：

在这个页面，你填入你的手机号码（前面加上+86）点击
Send你会收到一个字符串

输入字符串，你就成功申请到一个GoogleAppEngine的账
户啦！恭喜现在开始创建一个应用：

照上面的填入你自己想取的应用名称，点击Save就可以啦！
出来下面的这个页面就说明你创建成功了一个应用。

回来，我们就会看见我们刚刚创建的那个应用已经出现啦！

至此，我们这一步已经完成。现在转到GAppProxy源码包的
下载及其上传步骤！

2.下载GAppProxy源码包，上传至Google App Engine应用

GappProxy所需文件已上传到网络硬盘

原始下载

http://gappproxy.googlecode.com/files/fetchserver-1.0.0beta.tar.gz

http://gappproxy.googlecode.com/files/gappproxy-1.0.0beta.tar.gz

解压fechserver服务端源码包，里面东西如下：

这里我们打开FetchServer文件夹中的app.aml文件 (用文
本编辑器不是记事本,用Ultra Edit ，notepad之类的)

修改第一行中application后面的名称，把
your_application_name改成你刚刚创建的应用名称，比如你
的AppEngine地址是aaa.appspot.com，那就是application帐
号就是aaa（记着冒号和用户名之间还有个空格，最好就是把
your_application_name这一项全选中，从开始的y选到结尾
的e一个字符也不差，然后修改成你的用户名，在英文输入法
状态下）保存这个文件，退出

上传方法一：（较简易）

我这里用的是一个Google App Engine的第三方上传工具
SDUpload ，下载地址：http://code.google.com/p/sdapp
/downloads/list。这个东西不需要配置Python和Google
App Engine SDK的运行环境，在Windows下直接运行。

上传命令：SDUpload update fetchserver-1.0.0beta

其中：SDUpload为程序名；update为更新或上传的命令；
fetchserver-1.0.0beta是程序所在目录。

首先，先下载SDUpload程序，解压后，将
fetchserver-1.0.0beta文件夹拷贝放到SDUpload文件夹里面：

我们直接在window命令行（开始—运行—cmd)输入操作命令，进入SDUpload文件夹，然后
输入SDUpload update fetchserver-1.0.0beta 命令，按回车

下面会提示你输入Google邮箱帐号以及密码，照提示输入完以后点击回车
即开始上传。上传成功后再进入你的Google App Engine 账户查看是否上
传成功！（以防万一）

测试 fetchserver：打开浏览器，
进入 http://yourname.appspot.com/fetch.py
如果得到 “GAppProxy/1.2.0 beta 已经在工作了”证明安装成功。
这里的yourname是你的用户名。

上传方法二：

这个就是传统的上传，比较繁琐，但比较可靠，需要先下载Python2.5以上
以及Google App Engine SDK开发包。

Python 2.6.1下载 http://www.python.org/ftp/python/2.6.1/python-2.6.1.msi

Python 2.6.4下载 http://www.python.org/ftp/python/2.6.4/python-2.6.4.msi

Google App Engine SDK 1.3.0下载
http://googleappengine.googlecode.com/files/GoogleAppEngine_1.3.0.msi

Python以及Google App Engine SDK安装完成后，把前面下的fetchserver文件解
压到Google App Engine SDK安装目录里。点开始->运行输入cmd，调出DOS ，
进入刚刚安装好的Google App Engine SDK安装目录，输入：
appcfg.py update fetchserver-1.0.0beta 然后会有提示你输入Google账户以
及密码（输入密码是CMD不会有任何反应），回车就上传了。

同样，上传后，再进入你的Google App Engine 账户查看是否上传成功！（
以防万一）

3.设置浏览器，成功实现代理

解压上面下载的GAppProxy-1.0.0beta.exe文件安装（其实不算是安装，这个就
是一个自解压文件）

运行gui.exe，在Use Fetch Server里面填上你自己在GAE上架设了Fetch Server，
例如，你的AppEngine地址是aaa.appspot.com，那application帐号就是aaa，
则你应该在Use Fetch Server里面填上：http://aaa.appspot.com/fetch.py，
再勾选Use Fetch Server，点击Save，以及Quit保存设置重新启动GAppProxy
即可生效。

要是想直接注册为系统启动项，就打开GAppProxy里面的service文件夹，
双击install.bat文件，这样就可以将其注册为开机启动，会很方便！
查看任务管理器看是否有proxy.exe和srvany.exe两个进程，有就成功

现在点击桌面IE右键属性（打开IE—工具—Internet选项）–>连接–>
局域网设置，GAppProxy的默认地址端口为127.0.0.1:8000，如下图：

这样就大功告成啦！

这个个人服务器每天有1G的流量，对于日常应用浏览网页
是足够的，而且速度很快，跟直接打开网页一样，推荐大
家使用。打开你的Youtube，Twitter，开始冲浪吧！

有什么不懂得可以到这个网去看一下，有各种方案和问题
解答https://groups.google.com/group/gappproxy

第五冠

2010-06-24T16:04:00.000+08:00

这是一段波澜壮阔的史诗，属于科比的。

　　他带着伤病坚持到底，贡献绝杀，刷新纪录，完成复仇，伟大的一幕不缺乏友谊。当这些关键词聚在一起，就是科比的第五个冠军。

　　复仇 >>他一手抓球，一手指向远方，这一刻属于他，他的快意恩仇。

　　科比说：“这是我迄今为止最美妙的一个总冠军。”

　　湖人和凯尔特人的历史恩怨，只是这场复仇的注脚，2008年6月17日，39分输掉第六场后，科比说：“我们已经做得不错了，但这还不够。”那是一段难堪的岁月，科比完全沉浸在痛苦之中，但他却选择掩饰。奥尼尔幸灾乐祸地出唱片讽刺他，科比轻描淡写地说：“我没把这当回事。”

　　那个时候信他，你就输了。

　　他走出更衣室的同时，也许下承诺，“让我们明年再来”。2009年不属于复仇，尽管科比拿到总冠军，但他的对手换成魔术。可以想象，当科比再一次在总决赛遇见凯尔特人，他远比想象中更加兴奋。科比说：“我没有把这当成是一次成功卫冕，我只是把这当成争夺总冠军。”

　　而在总决赛之前，科比刚刚经历了一次复仇，西部决赛，湖人的对手是太阳，这同样也是一次复仇，科比在2006和2007年都被这个对手挡在第二轮之外。

　　但这样的复仇并不是科比所需要的，奥多姆、拜纳姆就好像打了鸡血一样激动，但科比说：“我不恨太阳，我只是讨厌失败。”过程跌宕起伏，但科比场均33.7分，太阳主教练金特里说：“科比是最好的篮球运动员。”这只是真正复仇之前的开胃菜，科比说：“两年前凯尔特人教会了我们怎么夺冠，现在让他们看看我们成熟了没有。”

　　于是就有了也许是史上最伟大的总决赛七场大战，于是就有了奥尼尔的服软，于是就有了科比灿烂的笑容。他说：“我其实很记仇。”

　　他举起总冠军奖杯，然后又举起总决赛MVP奖杯，漫天飞纸的背后，是凯尔特人落寞的身影。快意恩仇，就是这样。

　　纪录 >>他只比乔丹差一个总冠军，而他正走向第二个三连冠。

　　2010年的总决赛，注定成为科比的一座里程碑。

　　他在总决赛投中的总三分数，超越了乔丹，而他在总决赛的总得分，超越奥尼尔，成为现役第一人，而他的5枚总冠军戒指，只有费舍尔和他共享。而真正完全属于他的纪录，是他在季后赛中拿到5052分，联盟历史上最年轻的季后赛5000分先生。

　　这些纪录见证科比的历史，但并不能描述出一个有血有肉的科比。首轮季后赛还未打完，巴克利说：“科比老了。”然后他很快被扇了一记耳光，科比的爆发将湖人送进第二轮，而年轻的杜兰特则只能等待下次机会。

　　接下来的一切，更像是这一幕的复刻，当湖人从2比1变成2比3，科比的身边从不缺乏恶意的揣摩者，但湖人最终连胜两场，科比在质疑声中走向冠军奖台。“他们都说我老了，而这个冠军，是对他们的最好回敬，”科比说。

　　除了冠军，科比的其他数据更令人吃惊，当大牌球员纷纷放弃最后几场无关大局的比赛，科比站了出来，他说：“我不会因为休息而错过比赛。”进入联盟14个赛季，科比一共打了1021场比赛———是历史上最年轻的1000场先生，最近三个赛季，他只缺席9场比赛。他的出场场次排在历史第88位，但他的出场时间，37366分钟，却排在第38位，季后赛他的场均时间达到40.1分钟。

　　现在，离他32岁生日，只有两个月。

　　在这个赛季之前，他已经实现了NBA球员的大满贯，常规赛、全明星赛、总决赛三项MVP都揽入怀中，得分王、第一阵容也是囊中之物，但他依然表现得就像一个刚进联盟的新人，他在一场比赛中投篮不佳，就会在接下来的训练中加练，甚至不惜为此改变比赛前不投篮的习惯。

　　“每一次我看到他如此努力，我都会和自己说，他的成功是必然的，”科比的队友费舍尔说。

　　创下这些纪录，也是必然的。

　　绝杀 >>一个赛季，3次绝杀，3次准绝杀，他是最值得信赖的人。

　　总决赛最后一场，最后时刻，科比像鹰一样攫住球。这原本像极了想象中的剧本，第七场的最后一秒钟，湖人落后，科比出手，但科比没有，因为他们已然领先4分，总冠军再无悬念。

　　他也不需要用绝杀来证明自己，就在这个赛季，他为湖人贡献了6次制胜一投，其中3次绝杀，而且这还不包括他在赛季初和雷霆的比赛中，最后18秒两罚两中锁定胜局。去年夏天，老K被问及他的美国队到底谁会来执行最后一投，K教练给出答案———科比。

　　几乎是盖棺论定，现役球员中，投最后一球，最值得信赖的，就是科比，哪怕是他的对手也只能服气。

　　2009年12月4日，湖人主场击败热火，赛后，韦德跑到湖人的更衣室，他先和坐在更衣室外的科比妻子瓦妮莎寒暄两句，又抱起科比的女儿，然后他瞪着科比，眼睛中满是愤怒和惊讶。科比耸了耸肩：“嗨，哥们儿，你想要我怎么做？”

　　还剩3.2秒，湖人落后两分，科比面对韦德，在三分线弧顶单脚起跳，球碰到篮板后直接坠入篮圈。“如果赛前有人告诉我，科比能在三分线外踉踉跄跄地起跳，然后球砸到篮板也能进，我肯定以为那个人在说梦话，”韦德说。

　　但不是只有韦德才是牺牲者，12天后，科比又在加时赛中后仰跳投绝杀雄鹿，迈克尔·里德说：“输给科比，尤其是以这种方式，我恨透了。”科比的仇家名单仍在增加，1月1日，新年大战，科比三分绝杀国王；2月1日，科比在还剩7.3秒时投中最后一球，领先凯尔特人1分；2月23日，还剩8.8秒，科比命中三分，客场险胜灰熊；3月9日，科比又让猛龙成为牺牲品。

　　把球交给科比，让他执行最后一投，就这么简单。

　　伤病 >>若不是科比缠着绷带，里弗斯都已经忘了他是带伤作战。

　　科比亮了亮手指，他说：“如果没有绷带，我甚至抓不起篮球。”

　　这是他夺冠之后的感慨，而在此之前，他告诉所有人，手指早已经好了。2009年12月11日，科比带领湖人击败森林狼取得11连胜的同时，也戳伤了他的手指，但他没有接受手术，而是在接下来的20天内，场均轰下34.9分，这其中包括3次40+和两个39分。

　　伤病从不是他的推托之词，尽管他因为脚踝受伤错过全明星，但科比迅速回到球场，他说：“我像羚羊一样能跑能跳。”他的腰也有伤，但科比说没有问题，他的膝盖要在今年夏天抽出积水，但科比说“不会影响比赛”。他购买直升机的惟一原因，是因为他已经难以忍受路途奔波。

　　当总决赛打完第四场，里弗斯恍然大悟般地说：“如果不是科比手指缠着绷带，我都没法想象他还有伤。”这是他的右手食指，是他的投篮指，但绷带从黑色变成白色再变成黑色，科比却从未停止投篮。他用这根受伤的手指，投中一记绝杀，三次准绝杀，但换来的却是巴克利的“我觉得他投中的都是运气球”。

　　科比没有反驳，他的每一次成功，都被认为是理所当然，但他的每一次努力，每一处伤病，都被人抛到九霄云外。

　　科比说：“我只是在和自己作斗争，我想看看，我到底能有多出色。”

　　他从杰里·韦斯特手中接过湖人史上得分王的称号，但他的脚踝按照菲尔·杰克逊的说法，“无法着地，钻心般疼痛”；他追平魔术师约翰逊的5个冠军纪录，但总决赛结束后，他就要进行膝盖手术。

　　哪怕是队友都已经看不过去了，阿泰斯特说：“我觉得他应该休息了。”对胜利的渴望，无法让科比像其他人那样平静，他说：“我只是想赢。无论我做什么，我只是想赢。”

　　所以他赢了，哪怕伤痕累累。

　　友谊 >>科比搂着费舍尔，他的5个总冠军，都有老鱼的身影。

　　走向巅峰的人，未必总是孤独的，比如科比。

　　曾经有一段时间，科比被认为是孤独的，这是因为费舍尔，一个和他同一年进入NBA，而且和他做了11个赛季的队友。费舍尔说：“不管你信不信，我从来没有去过科比的家。”

　　他们就好像是两类人，科比来去匆匆，而费舍尔会留在更衣室接受采访；科比冷酷，言简意赅，而费舍尔和善，接受采访就像聊天般絮絮叨叨；科比是超级巨星，而费舍尔更像是巨星身边的影子。但终究有些镜头令人难忘，科比在去年绝杀热火，跳到他背上的是费舍尔；总决赛第三场费舍尔最后一节爆发，科比握拳仰天长啸，然后又是拥抱；当总决赛结束，科比将总冠军奖杯递给费舍尔，然后他搂着费舍尔，这是他们11年的并肩作战中，第五次手捧总冠军合影。

　　费舍尔是更衣室中，惟一可以批评科比的球员，科比说：“他是我们言语和行动中的领袖。”费舍尔说：“如果你不能赢球，我就不会爱你。”

　　这是科比和费舍尔的择友之道，他们渴望胜利，并且为了这个目的走到一起。费舍尔说：“科比其实挺好相处，而且他还在不断成熟。”

　　他和他的朋友一起拿到总冠军奖杯，而现在他需要去支持他的另一个朋友。庆祝游行结束，科比即将登上前往南非的飞机，那里有刚刚率领阿根廷三战皆胜跻身十六强的梅西———

　　他们是朋友，他们是赢家。

小飞侠科比的经典语录(转载)

2010-06-02T17:36:00.001+08:00

身披24号战衣的NBA湖人队球员科比绝对是今年的夺冠大热门，小编整理出他的经典语录，来看看你认同他的行事风格吗？你最喜欢的又是哪一句呢？

“Love me or hate me, it’s one or the other. Always has been. Hate my game, my swagger. Hate my fade away, my hunger. Hate that I’m a veteran. A champion. Hate that. Hate it with all your heart. And hate that I’m loved, for the exact same reasons.”

爱我或者恨我，两者必有其一。一直都这样。有人恨我的比赛，我的狂妄自大；恨我的后仰投篮，我对胜利的渴望；恨我是一名老将，恨我获得过总冠军。恨吧，用你的全部心思去恨吧。然而也有很多人深爱着我，理由却和恨我的人一样。

“It’s funny. I think a lot of people, a lot of writers, try to take shortcuts in their assignments and just regurgitate what somebody else may have written, you know, instead of truly saying what’s going on," Kobe says. "I'm no different than anybody. Basketball to me, it’s a game that I want to try to be the best at, try to work at as much as possible. But I understand it’s a game. But I'm extremely outgoing. People say, 'He's quiet' and all that stuff. That's crazy. They obviously don't know me. So, I mean, people that know me and people that seen me interact, stuff like that, I'm completely opposite of what they read. And a lot of people actually tell me that. They'll say, 'Man, you're nothing like I thought you were.”

“这太有意思了。我想很多人，很多作家，老是想尽办法在他们的写作任务中反复其他人可能已经写过的东西，而不是真实记录正在发生的一些事情。” 科比说，“我跟其他人没什么差别。篮球对于我来说，是一场我要尽可能努力做到最好的比赛。而我理解那是一场比赛。我是很外向的。人们说我很寡言，那简直胡说。他们显然就不了解我嘛。因此，那些了解我，跟我交流的人知道我跟那些报道中的完全不一样。事实上很多人也会这样跟我说，‘你跟我想象中的完全不同。”

"I just go. I just go. I just keep going until it feels right to me," Kobe says of his habits. "If something doesn't feel right, I'm gonna stay there until I get it right. I just continue to keep pushing and pushing and pushing. That’s all I've known. That's how my parents raised me. If you're going to be focused on something, if you want to do something, you can't, you can't go about it in a half-assed way. You really gotta dedicate yourself to it, try to be the best at it. That's the only way."

“我只是不停地训练，不停地训练，直到我满意为止。”科比谈到他的习惯，“如果我感觉一些东西不对，我会呆在那不停地训练，直到我做到对为止。我只是不停地激励自己，不停地激励自己。这是我很了解自己的地方，也是父母教育我的东西。如果你要专注于某些事情，如果你想要做某些事情，你可不能半途而废，你得倾注你全部精力去完成那些事，尽力去完美地完成那些事。这就是事情解决的唯一途径。”

"I'm playing against great players, playing against the best in the world. The competition - that’s what I've always wanted."

“我正在跟伟大的球员进行对抗，跟世界上最好的球员进行对抗。这种对抗是我一直都渴望着的。

"My parents are my backbone. Still are. They're the only group that will support you if you score zero or you score 40."

“父母仍然是我打篮球的支柱。只有他们自始自终在支持你，不管你得到0分，还是砍下40分。”

"I'll do whatever it takes to win games, whether it's sitting on a bench waving a towel, handing a cup of water to a teammate, or hitting the game-winning shot."

“为了取得比赛的胜利，要我做什么都可以，不管是坐在板凳席上给队友递毛巾、递水，还是上场执行致胜一投。”

"As far as carrying the torch for the years to come, I don't know. I just want to be the best basketball player I can be."

“我不知道需要多长时间才能取得辉煌，我只是想尽我所能去成为最出色的篮球运动员。”

"Everything negative - pressure, challenges - is all an opportunity for me to rise."

“压力、挑战，这一切消极的东西都是我能够取得成功的催化剂。”

选自：沪江英语

我相信TA存在

2010-05-31T23:17:00.002+08:00

我相信TA存在，用运气让我坚信，用挫折让我明确，用绝望让我走向正确的方向。

MouseClick – 懒人键盘鼠标转载小众软件 > 实用工具

2010-05-28T17:04:00.000+08:00

有鼠标键盘，也有键盘鼠标。MouseClick 就是一款可以用键盘代替鼠标按键的软件，它能帮助你自动进行点击鼠标左键、右键以及双击操作。@Appinn

鼠标其实让人又爱有很，它能让你灵活的操作电脑，但当遇到大量重复操作时，会让人头皮发麻的，比如几千上万个鼠标点击。。。

MouseClick 是一个人性化的软件，能够自动按间隔时间点击鼠标左键，自动拖拽，并且支持 Mac OS X，Linux 和 Windows 三大平台。

通过快捷键控制鼠标点击，可修改，默认快捷键如下：

Alt + D 打开/关闭自动拖拽

Ctrl + ` 模拟鼠标右键

Alt + ` 模拟鼠标双击

Ctrl + F11 打开/关闭自动点击模式

Shift + F3 自动模式下切换到右键

Shift + F3 自动模式下切换到双击

你需要多练习才能适应用键盘操作鼠标按键。

下载(188 KB): uushare | 官方网站 | 来自小众软件 | skydrive

Google 员工开发的超强 Chrome 快捷键扩展：Shortcut Manager 转载Chrome迷

2010-05-28T17:00:00.001+08:00

Shortcut Manager是一款非常强大的 Chrome 快捷键增强扩展，它允许用户给 Chrome 浏览器赋予更多更方便的快捷键功能，而且可以完全按照用户的想法自定义快捷键功能。比如打开喜欢的网站、执行常用的浏览器操作、甚至可以直接通过快捷键执行 JavaScript 代码，包括远程的 JavaScript 代码都没问题。从该扩展位于 Chrome 官方扩展中心的主页上来看，其开发者联系方式为 jumpei@google.com ，基本可以断定该扩展由 Google 员工开发（只有 Google 内部员工拥有后缀为 Google.com 的电子邮箱）。

安装 Shortcut Manager 扩展后，首先需要进入该扩展的设置页面添加快捷键并赋予每个快捷键的功能，我们可以看到设置页面主要分为左右两栏，左边栏的主要功能是管理快捷键，包括导出/导入设置，也就是说可以对已经设置好的快捷键进行备份，需要恢复的时候直接导入之前的备份即可。右边的主要功能是对具体的快捷键赋予功能，为了方便大家，我简单的将这个页面的主要功能汉化了一下。

笔者认为该扩展最方便的地方在于可以指定任意键作为快捷键，甚至包括键盘上的Home、End、Insert 等等都可以用作快捷键。如上图，比如访问 Chrome迷，我们可以直接将快捷键设置为 cm，这样你想要访问 Chrome迷的时候，就可以直接按键盘的 c、m就会直接打开 Chrome迷。

该扩展另外一大强悍的地方在于可以直接通过快捷键执行 JavaScript 代码，比如我们之前介绍的一款优秀的 Chrome 翻译助手尚译其实就是一个 Javascript Bookmarklet，虽然直接点击一下书签栏也很方便，但使用快捷键来激活则明显更加方便，大家可以直接将该工具的 JavaScript 代码（见下面）贴到 Shortcut Manager 设置页的 JS 代码框中，再为其指定一个快捷键，比如 sy，这样调用该工具就更加方便了（如上图）。

尚译 Javascript 代码：

javascript:void((function(){if(window.Como&&window.Como.someyi){Como.someyi.open()}else{var a=document.createElement('script');a.setAttribute('type','text/javascript');var b=document.charset?document.charset:document.characterSet;var c=b.toLowerCase()=='gb2312'?'pack-gb2312.js':'pack-utf8.js';a.setAttribute('src','http://yi.comsome.com/'+c);document.getElementsByTagName('head').item(0).appendChild(a);Text.prototype.tagName='#text'}})())

当然，该扩展还可以给快捷键赋予更多非常非常方便的功能，大家可以自己尝试，这里就不做过多的介绍了。总之，笔者认为 Shortcut Manager 是一款非常优秀的 Chrome 快捷键扩展，强烈建议各位 Chrome迷使用。
"

Gmail Labs 新功能：把标记图标挪到前面来转载谷奥

2010-05-26T23:55:00.001+08:00

Gmail里有些邮件会附加有特殊的图标，比如告诉你它是带附件的、是Gtalk聊天的、是Google Buzz的、是带有日程表的等等，这些图标让你一目了然就能知道该邮件对话的类型，现在只要在Gmail Labs里打开Move Icon Column，即可将这些图标从邮件后面挪到前面，也就是紧挨着星号图标：

Google Apps里的Gmail同样也可以实现这个新的Labs功能。

疯子

2010-05-23T23:33:00.000+08:00

小巷里面，住着一个疯子

太阳刚露面的时候，就站在巷口，手舞足蹈，唱着只有他一个人懂的歌

有时候，会端着一碗热干面

......

直到夜幕低垂，他也没有回家休息的意思，低声吟唱，还伴随着莫名的舞蹈

有时候，会拿着一个小苹果

每一天

早上我出发的时候他已经在手舞足蹈

晚上我回来的时候他依然在倾心歌唱

第一个月：就只有一条小路而已，还被他挡着，真是很烦

第三个月：有时候看看他哼哼，似乎，还有点儿意思

第六个月：从早到晚，真是勤奋啊

第十个月：每天都在......每天......

他只是个疯子而已

他一直没有放弃

傻

2010-05-23T23:30:00.002+08:00

小时候我们傻，什么都不懂，叫做幼稚，老妈说，傻不拉叽的，笨！

长大一点了还是傻，懂一点点了，也会不懂装懂了，叫做乳臭未干，大哥说，小屁孩，装！

再大一点点，接触社会了，虽然傻，但以为自己懂了，叫做愣头青，前辈说，恩，后生可畏，言下之意是，毛头小子，被玩死了还不知道，芍！

老一点了，大部分事情都懂了，知道自己还有点傻，不如让大家都觉得自己傻，叫做世故，新来的年轻人会说，看那老头，傻的可以呢。接触过的人说，这个人，滑！

老的不行了，其实啥都知道了，管他傻不傻，也没啥好计较了，叫做大智若愚，有人会说，那老头，啥也弄不清了，还清高呢。也有的人会说，老人家，过来人，泰斗啊，牛！

我们都是大傻瓜

李雷和韩梅梅

2010-05-23T23:28:00.000+08:00

第一次听的时候，并不觉得好听

听了好多遍之后，突然伤感了

一切从那本英语书开始的
那书中的男孩li lei
身边的女孩名叫han meimei
还有jim lily 和 lucy
kite lin tao 和 uncle wang
一只会说话的鹦鹉叫polly他到处飞

好多年没有再一次翻开它
但那一段说的谁和谁
偶尔还能细细回味
书中他们的喜与悲
书外身后的是与非
还有隐隐约约和我一起长大的小暧昧

后来听说li lei和han meimei
谁也未能牵着谁的手
lucy回国 lily去了上海
身边还有了那么多男朋友
jim做了汽车公司经理
娶了中国太太衣食无忧
li tao当了警察 uncle wang他去年退了休

有点遗憾li lei和han meimei
谁也未能牵着谁的手
一样的是我们都有了个
当初不曾遥想的以后
还好polly它还活着
就像我们当年的小美好
他永远都不会老在心底不会飞走了

好多年没有再一次翻开它
但那一段说的谁和谁
偶尔还能细细回味
书中他们的喜与悲
书外身后的是与非
还有隐隐约约和我一起长大的小暧昧

后来听说li lei和han meimei
谁也未能牵着谁的手
lucy回国 lily去了上海
身边还有了那么多男朋友
jim做了汽车公司经理
娶了中国太太衣食无忧
li tao当了警察 uncle wang他去年退了休

有点遗憾li lei和han meimei
谁也未能牵着谁的手
一样的是我们都有了个
当初不曾遥想的以后
还好polly它还活着
就像我们当年的小美好
他永远都不会老在心底不会飞走了

愿有情人终成眷属！

风声不存在

2010-05-23T23:14:00.002+08:00

每次写些乱七八糟的东西，都不知道怎么开头

最简单的方法，就是引用他人的文章了，那么，今天引用一位好友的签名吧——

一世人生有炎凉，晨也担当，暮也担当；丈夫遇事似山冈，毁也端庄，誉也端庄。

惶惶走过这一世，并不知道什么时候会快乐，什么时候会痛苦。不知道什么时候会邂逅，什么时候会遭遇。不知道什么时候会被敬的奉为上宾，什么时候会被恨的咬牙切齿。不知道什么时候会触动到奋起直追，什么时候会打击至失落莫名。不知道什么时候能一览众山小，有睥睨天下的气概，什么时候会一落千丈，被人在身后唾骂。

处世，难在当但二字，为人，最重是要端庄

不惧蛮语方能胸怀坦荡，认识自己方能心神内敛，始终如一方能无畏无惧

回首的时候，讪讪而笑；远望的时候，信心满满

一舞红尘起，一书风雨平

为 Chrome 地址栏添加自动 https Google 搜索转载自小众软件

2010-05-23T00:01:00.004+08:00

Google 已经开启了 HTTPS 加密搜索方式，以确保搜索过程中的安全性。现在你就可以使用 https://www.google.com 来进行搜索，这个过程中，第三方无法截获到你的搜索关键词，很大程度的保护了用户隐私，这在部分国家尤其重要。@Appinn

而我们平时使用的 Chrome 浏览器，其创新性的地址栏直接搜索简化甚至改变了人们使用搜索引擎的习惯，你不需要再去打开 Google 等搜索引擎去搜索，而直接在地址栏输入关键词即可。

这可以让你更大程度的快速离开 Google（没错，Google 的设立理念中有一条就是让用户更快速的离开 Google）。但目前的 Chrome 版本还默认使用普通搜索地址，前段时间如果你在中国大陆，搜索 “胡萝卜” 会出现连接中断的情况，而使用 https 搜索就完全不会出现这个问题了。

那么，如何做呢？

0.1 直接访问 https://www.google.com 会自动跳转 Google 香港，请点一下页面底部的 Google.com in English，然后再地址栏加上 https 即可。目前 https Google 搜索还是 beta 版本。

1. 首先你得使用 Chrome 浏览器，你可以在 Google Chrome 下载到标准版本，或者下载开发版本 Chromium，建议普通用户使用标准版。

2. 运行 Chrome，在地址栏右键，选择 修改搜索引擎(E)…，在打开的新页面中选择 添加(A)…

3. 输入 HTTPS Google 信息：名称与关键词随意，注意关键词可以可以让你在地址栏快速使用其他搜索引擎，比如 Https Google 的中英文搜索结果切换。下面提到。在网址中输入：

英文搜索：https://www.google.com/search?hl=en&q=%s

中文搜索：https://www.google.com/search?hl=zh-CN&q=%s

选择你常用的语言，点击确认，并且设置为默认搜索引擎，至此，已经可以直接在 Chrome 地址栏输入关键词进行搜索，你会发现地址栏已经有了 https，而 Google 搜索任意关键词也不会出现重置问题了。

P.S. 如果你有其他浏览器的 https google 使用方法，那么来分享给大家把。

update: Firefox 扩展：Secure Google Search / Google SSL Search via Lucifr

终于回来了，感谢～～

2010-05-11T22:13:00.005+08:00

本来，我是一个良民，只走正门的那种。

结果续blogger、picasa、facebook、twitter之后，今天dropbox也挂了。于是我跳了，被逼的。

好吧，继续blogger，无视阻隔！

版权声明 Copyright and usage

2009-06-20T15:57:00.009+08:00

本站内容部分来自网络，部分由Louis原创，除用于商业用途外，你可以任意转载，但请注意标明出处。

如有某些内容侵犯了您的权利，请提醒我，我将尽快删除这些内容。

鹿丸&阿甘

2009-05-14T23:03:00.002+08:00

聪明的人，做什么事情似乎都会事半功倍，

火影里面，估计是智商最高的鹿丸，有一句口头禅——“麻烦”，

最聪明的人最怕麻烦，大概是因为，需要考虑的东西太多。

憨厚一点的人是很幸福的，因为没有多少需要考虑的事情，别想，当然就很轻松。

这一点上，聪明的人都会羡慕阿甘，因为他不用想，只用奔跑就可以了

但是又有多少人能够做到单纯的，永不放弃的奔跑呢？

是周密的考虑一切，选择最佳的道路难呢，

还是永不放弃的努力，一心一意的奔跑更难？

好烦躁啊，顺便也鄙视移动的信号，让打个电话都这么难，似乎比上面两者都难。

火箭 Vs 湖人

2009-05-10T15:42:00.001+08:00

看到一篇超级搞笑的文章“人生哲理的数学表达式”

2009-04-27T11:29:00.001+08:00

人生哲理的数学表达式
   在我那个高中年代，正值反击右倾翻案风的年代，但是趣味数学在我们几个同学中却饶有兴趣。一个有趣又可爱的方法可看到“数学之美”以及“神”的神奇总和。

1 x 8 + 1 = 9
12 x 8 + 2 = 98
123 x 8 + 3 = 987
1234 x 8 + 4 = 9876
12345 x 8 + 5 = 98765
123456 x 8 + 6 = 987654
1234567 x 8 + 7 = 9876543
12345678 x 8 + 8 = 98765432
123456789 x 8 + 9 = 987654321

1 x 9 + 2 = 11
12 x 9 + 3 = 111
123 x 9 + 4 = 1111
1234 x 9 + 5 = 11111
12345 x 9 + 6 = 111111
123456 x 9 + 7 = 1111111
1234567 x 9 + 8 = 11111111
12345678 x 9 + 9 = 111111111
123456789 x 9 +10= 1111111111

9 x 9 + 7 = 88
98 x 9 + 6 = 888
987 x 9 + 5 = 8888
9876 x 9 + 4 = 88888
98765 x 9 + 3 = 888888
987654 x 9 + 2 = 8888888
9876543 x 9 + 1 = 88888888
98765432 x 9 + 0 = 888888888

   很炫，是不是？再看看这个对称式
1 x 1 = 1
11 x 11 = 121
111 x 111 = 12321
1111 x 1111 = 1234321
11111 x 11111 = 123454321
111111 x 111111 = 12345654321
1111111 x 1111111 = 1234567654321
11111111 x 11111111 = 123456787654321
111111111 x 111111111 = 12345678987654321

   现在，注意看这个“101%”。从一个严密的数学观点，什么等于 100%?给你超过100%代表什么意思?有些人说他们付出超过100%，可能吗?我们都曾经有过这种境遇，就是别人要求要你去付出超过 100%，甚至要求达到 101%? 生活中什么等于100％？

    这里有一个小小的数学公式或许能帮忙解答这些问题
    如果英文字母和1-26数字依序相对

A B C D E F G H I  J  K  L  M  N  O  P  Q  R  S  T  U  V  W  X  1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Y  Z
25 26

    如果努力工作  H-A-R-D-W-O-R- K
                   8+1+18+4+23+15+18+11 = 98%
    还有知识 K-N-O-W-L-E-D-G-E
              11+14+15+23+12+5+4+7+5 = 96%
    而态度 A-T-T-I-T-U-D-E
           1+20+20+9+20+21+4+5 = 100%

    那么看看“神的爱”能达到多少
       L-O-V-E-O-F-G-O-D
       12+15+22+5+15+6+7+15+4 = 101%

    因此我们从以上数学运算，得到一个确定的结论，那就是，努力工作和知识只能让你接近目标，而态度能让你达成目标，唯“神的爱”能让你超越颠峰。

    人生中还有什么可以用数学等式来表达的呢？

Have a great weekends…
      and that God bless you!

湖人

2009-04-26T17:58:00.001+08:00

今天下午回来，遇到一个经常和我一起看比赛的哥们，回头见到我，就说了俩字：“湖人”。

你说这是啥意思啊？

上网一看，湖人赢了，输了一场之后的胜利，3：1了，科比这场打的很牛。

恩，虽说就两个字，说的事情可是不少啊，这哥们可是真厉害。

要赞一个，不愧是咱看NBA的。

今年最后一场球

2009-04-25T17:02:00.000+08:00

再投几个留给以后回味，恩，不容易啊

80 后的毛病

2009-04-23T17:02:00.000+08:00

以下80后十大烦恼的症候特征，看看你占了几条？

1.成天泡在网上，又不知道做什么好。

80后最常说的一句话是“无聊”，尽管他们在网络上聊天花去了大把的时间。

建议：聊天作为一种基本交流方式，所要达到的目的是获得认同。网上聊天很难达到这种认同，所以越聊越无聊。学习和工作累了，玩一玩游戏没错，但是打怪练级那些游戏基本上是得不偿失的。适量可以，过度的话，费时间，伤身体，还花钱。靠玩游戏来交流感情是不现实的，要交流感情最好还是找个人去咖啡吧，或者堡个电话粥吧。

2.浮躁，好预测未知妄下定论。

对看过的电影和电视剧，会按耐不住向别人透露下一个情节或者结局。对不了解的事物，根据一丁点信息发表长篇大论的见解，并且多半是批判的。对权威毫无理由的不耐烦，但绝不公开挑战，只热衷于影响身边的几个人，并有得到认同的强烈欲望。一旦不能如愿，就不再发言，部分人会暴跳如雷，令旁人费解。

建议：多出去旅行，多读书，多参加团体活动，多接触社会。世界的绝大部分真相在我们的视野之外，浮躁是个人修养浅薄的表现，人既是社会成员也是自然的组成部分，需要积淀对世界尽可能的多认识，才能达到意识的足够高度，才能让人看起来不那么浮躁。

3.瘦弱，不爱运动。

对健壮的人心存嘲讽，对肌肉和力量心存恐惧。在审美上受日式漫画的影响，崇尚中性美和病态美。与第一点有一定关系，在身体的耐力、韧性和爆发力上，更热衷于后者。但是在受到刺激之后，又会表现出病态的固执。这样就表现为两个极端，一方面弱不禁风，另一方面又偶尔会有惊人之举。

建议：健身，多进行户外运动。身体是人最接近自然的组成部分，一个健康强壮不容易被击倒的身体可以让我们终生收益。

4.性格软弱，喜欢为自己的意志不坚定找理由。

不喜欢通过沟通达到与外界的意见统一，而是表面妥协，内心强烈反感，表现为通常所说的叛逆。性格软弱表现在与异性相处方面就是易犯花痴，对异性的正常关怀想入非非。在弄清楚是怎么回事之后，即使真的喜欢对方，也不敢大胆追求，而是找个理由退缩。通常的理由是说自己不了解爱情，也不想了解。

建议：堂而皇之的与人打一架，正儿八经的谈一次恋爱。从自然法则的角度考虑的，与同性生物打架和向异性求爱都是走向成熟的标志。

5.消极，拒绝长大。

不喜欢被人说成熟，尤其不能容忍被人说是老男人或老女人。不耐烦与长辈讨论一些实际的问题，反感政治，厌恶参加长辈在场的应酬。要负责任的事情，会让他们觉得焦虑不安和无奈。

建议：尝试了解父母的不易。也可以从哲学层面去了解索取和付出之间的辩证关系，就象课本里所说的权利和义务的关系。

6.选择性自闭，对熟人唠叨不休，对陌生人一言不发。

偏爱使用方言或者网络语言等非大众语言。吸烟，但是不敬烟。喝酒，但是不敬酒。不是他们感兴趣的话题，基本上很难交谈下去。多人参与讨论时，如果没有人邀请他发言，即使他已酝酿好发言稿，还是会选择沉默。

建议：这些其实都是在沟通上遇到的困难。建议扩大知识面，扩大社交圈，改变与人交谈的方式，勇敢表达自己的见解，努力将自己的观点传达并影响其他人。获得认同后就会产生激励，反复几次，就可以走出自闭。

7.习惯熬夜，25岁之前通宵次数明显较多。

有时候为了“合理安排时间”，干脆用通宵来减少熬夜次数。实际上下半夜都在打瞌睡。

建议：熬夜其实就是自闭在作怪。有熬夜习惯的人，白天就找到了关门睡觉的理由，避免了外界的骚扰。或者白天虽然没有在家睡觉，因为精神上萎靡不振，能造成“外界不关我事”的错觉，也能达到抵制外界骚扰的目的。建议立刻改变作息时间，打开心扉。

8.毫无理由的高傲。

觉得别人不可能了解自己，并以此作为对别人不屑的理由。不愿意听别人的建议，也听不进。这种高傲连他们自己都不知道为什么。

建议：由于时代因素，80后的自尊更为脆弱，从心理上就更趋向于自我保护，表现为对外界不信任。建议多了解一些社会规则，不管在什么场合，只要你在规则之内，你就是安全的，可以自由表达自己的存在价值。

9.做事不按计划，讨厌按部就班，永远不知道钱花到哪里去了。

以同时看多部小说，多部漫画为荣。喜欢同时着手几件事，忙得焦头烂额是他们喜欢的状态，尽管这些事情只要合理安排是完全可以按部就班轻松完成的。

建议：欲速则不达这个道理就不用说了吧。学会制定计划，可以避免紧急情况下全面崩盘的风险。

10.不问问题，过于依赖搜索引擎。

多数人喜欢用搜索引擎思考，将搜索引擎作为自己的智囊。

建议：互联网确实给了我们许多方便，但是互联网上的东西很多都是未经考证，经不起推敲的。所以要避免犯错，这个地方正需要80后拿出怀疑精神来，不能依赖互联网而使自身的学习功能退化了。

ACECAD—DigiMemo手写版

2009-04-20T16:18:00.003+08:00

这是一款相当优秀的手写版。

你只需要将它当作一般的文件夹，放入普通的纸张，用自带的笔来记录，你所写下的一切文字或者图画甚至涂鸦，都可以完美的保存为电子版。

更爽的是，你可以通过自带的软件，将你的笔记由图片格式变成word格式，包括图形：

有这么一个小玩意，完全就可以替代一般意义上的笔记本，并且能够把记录转换为电子格式，这样，通过onenote等等软件的管理，完全可以让所有手写的笔记电子化，并且有条理清晰的组织，甚至可以在电脑上迅速查找。

试想，当你想不起笔记中哪里记载了所需要的信息时，可以直接用关键词来搜索！这是多么让人兴奋的事情！

不过可惜了这么爽的好东西，在大陆市场上没有销售......只能海外代购。代购的话，那就价格不菲了......

哎，我慢慢攒钱吧～

开源难掩高成本八大原因企业慎选Linux

2009-04-07T12:40:00.002+08:00

微软和Sun的专有操作系统产品的成本可能要比红帽和 Novell的Linux产品成本低大约10%到100%，这取决于操作系统的配置和许可合同的长短。此结论比较适用于Windows Server 2003，Solaris 10以及Red Hat Enterprise Linux和SuSE Linux 。

现在，虽然Linux技术发展和普及的势头很迅猛，不过，仍然有一些企业坚持不使用Linux，他们的理由也很充分。以下就列举了其中的8个原因。

　　1.专利侵权

　　使用Linux操作系统极有可能会使用户在将来陷入专利侵权问题的牢笼，给用户带来无法量化的损失。比如微软就因为这个问题起诉过Linux厂商Novell和SuSE。

　　“如果某个企业用户想要部署Linux而是Windows或专有的Unix系统，那么这就是一个潜在的风险，” 企业管理协会（EMA）资深分析师Andi Mann说。EMA是一个独立的行业分析机构并且专门从事IT管理市场的咨询公司。

　　这种潜在风险造成的成本是不是能够足以使企业用户放弃使用Linux的念头呢？

　　2.Linux许可有可能成本更高

　　市场分析机构Yankee Group资深分析师Laura DiDio在自己的研究报告“微软、Sun反击Linux，力争让操作系统成本更低”中指出，微软和Sun的专有操作系统产品的成本可能要比红帽和 Novell的Linux产品成本低大约10%到100%，这取决于操作系统的配置和许可合同的长短。DiDio的结论比较适用于Windows Server 2003，Solaris 10以及Red Hat Enterprise Linux和SuSE Linux 。

　　3.内置/捆绑功能够大幅度节省资金

　　虽然，大多数Linux发行版也自带很多免费软件。但是，你花在专有操作系统上的钱绝对也令你物有所值---你可以得到数量非常众多、功能齐全的各种工具和服务。

　　DiDio指出，“如果你买了微软的软件保证（Software Assurance），你就需要支付一定的保费，但你同时也得到了很多东西。你可以获得免费培训。而且还能访问在线资产管理来跟踪许可，这样你就能避免买多或买少，这给你带来了巨大的方便。并且在家庭使用权方面你也可以获得较大的折扣。”

　　DiDio还表示，微软的软件保证即使对于只有10几个员工的小企业也绝对是物有所值，能够为它们节省数千美元，“而大型企业又可能会节省数百万美元。”

　　此外，DiDio还补充说：“经过改进的Windows补丁管理工具能够使网络管理员的工作效率大大提高---平均百分之五十至百分之八十左右，并且不会造成成本的增加。并且微软免费提供Windows服务器更新服务（WSUS）。而如果你选择Linux操作系统，那么你不得不将IT预算的百分之二十至百分之二十五用来购买第三方管理和性能优化工具，而这些工具已经包含在Windows许可中了。”

　　需要补充的是，Windows并不是唯一的Linux替代品。

　　如果你打算在服务器上使用虚拟化或类虚拟化的环境，“VMware的虚拟化技术往往会使每个服务器的每个CPU的成本增加一千美元或更多，” Sun公司Solaris营销部副总裁Marc Hamilton说。Hamilton还指出，包括Sun的Containers虚拟化设施不会增加任何额外费用。

　　4.Linux维护成本高

　　就购买成本而言， Linux操作系统通常会比专有操作系统要便宜。EMA的Mann在其“Linux管理的真相”中指出，Linux的购买费用---不包括支持费用--- 通常只有Windows的百分之十左右。例如，“对于一个有100个用户的网络应用环境，部署一个完全的Windows环境需要6万美元，而相应的开源软件只需要6千美元。”

　　但是，这并没有包括管理工具的成本。“在我看来，纯微软环境更易于管理，” Mann说。“这就是为什么比需要花大价钱购买Linux系统管理工具，没有管理工具，Linux环境是很难管理的，这是大家都公认的。”

　　如果你不擅长管理服务器环境或者如果你没有合适的管理工具，Windows将是一个更容易管理的系统而且成本也更低，Mann说。“软件发行管理、补丁管理……非Linux环境有很多更加先进的管理工具，特别是Windows操作系统，同时还有Unix和Solaris 。”

　　Linux和Windows管理工具的成本从零到几十万美元不等，比如IBM Tivoli 或CA Unicenter。“但是，对于小型环境而言，比较便宜的工具完全能够胜任，” Mann说。

　　5.聘请Linux技术人员可能需要花费更多的钱

　　“现在，操作系统治持维护人员的知识遂平有一个显著的差异，”资深IT管理人员Chris de Herrera说。“Windows支持所需要的专业知识比较少，想比之下， Linux则需要很多。”

　　Herrera说：“Windows的每一个应用程序都是已经预编译好的，所以一旦它们安装完毕，一般都能正常运行。而对于Linux操作系统而言，情况可能并非如此。另外再加上一些特殊要求，比如Linux 技术人员需要理解源代码管理和版本，一个例子就是DLL地狱。有些Linux应用程序需要一定版本的类库才能运行，这就有可能与其它应用程序冲突。”

　　Herrera表示：“系统支持和维护人员经验的差异以初级开发人员为界，而不仅仅是做系统管理。另外，Linux安装升级的过程可能会有些复杂，这取决于使用的升级方法。如果你选择的应用不支持，那么你必须手动完成升级。”

　　“企业使用Linux的前提条件是自己的IT员工对于Linux集成和基础设施必须相当熟悉，” ExtremeLabs公司总经理Tom Henderson说。

　　“如果你的IT技术人员对于Linux不是非常熟悉，那么你就需要对工作人员进行培训或者招聘一些具备这些技术的员工，” Henderson说。“经验丰富的Unix/Linux/HP-UX/Solaris 专业人员聘用价格往往那个非常高。”

6.使用非Linux的Unix可能是一个更好的选择

　　Linux是不是唯一能够运行在X86硬件上的非Windows操作系统，比如Sun公司的Solaris。这点很容易忘记

　　“与Linux发行版相比，Solaris的支持费用更低，”Hamilton说。“比如，Solaris 10的支持成本通常要比Red Hat Linux低百分之十至百分之五十或更多。”

　　造成这种现象的一个原因就是Solaris具有的一些特定功能，比如Solaris故障管理架构。如果出现一个内存DIMM失败，“Solaris 10操作系统将自动重新配置，而不需要重新启动。”虽然内存DIMM失败并不经常发生，“可是，如果你的网站有100或1000台服务器，那么你就不得不考虑这个问题，” Hamilton说。例如，如果你的远距离数据中心采用Linux操作系统，并且有200台服务器，“这可能意味着你将每天都要派出技术人员修复这个错误。”

　　7.硬件支持问题

　　“Linux对于硬件和驱动器的支持问题也应该引起注意，而Windows通常没有这方面的问题”Mann说。

　　“硬件兼容性问题并不是Linux独有的，”开源分析公司Red Monk 首席分析师Stephen O‘Grady指出。 Linux对于硬件的支持正在变得越来越好。但是仍然存在一些问题，尤其是在桌面上。

　　“Linux有可能缺少最常见设备的驱动支持，比如信用卡刷卡机或销售点终端机，这可能会让你额外支付很大一笔费用。” IndependentAssessment 分析师Alan Radding说

　　8.向Linux迁移成本过高

　　当然，Linux的总体拥有成本当然还包括迁移成本。

　　“关键应用的转换成本可能会很高，比如Microsoft Exchange Server，因为建立在Exchange之上的电子邮件、服务和应用都需要更换、修改或修复，” Henderson指出。

　　应用可用性也是一个值得关注的问题，O‘Grady指出。“有很多应用软件只支持Windows服务器或桌面。比如，像QuickBooks这样实用的软件却不能运行在Linux平台上。”

原文链接http://www.itxinwen.com/View/new/html/2009-04/2009-04-07-425101.html

NBA历史至今的四双数据

2009-04-04T16:14:00.000+08:00

内特·瑟蒙德，22分、14个篮板、13次助攻、12次盖帽，1974年10月18日公牛vs老鹰

埃尔文·罗伯特森，20分、11篮板、10助攻、10抢断（联盟历史上惟一一个由抢断构成的“四双”），1986年2月18日马刺vs太阳

奥拉朱旺，18分、16个篮板、10次助攻、11次盖帽，1990年3月29日火箭vs雄鹿

大卫·罗宾逊，34分、10个篮板、10次助攻、10次盖帽，1994年2月17日马刺vs活塞

Be in a puzzle about “You jump,I jump”

2009-04-01T13:56:00.002+08:00

“You jump,I jump” 参见《泰坦尼克号》，既《Titanic》

——题记

我一直不明白，为什么是“You jump,I jump”，也就是说，“I jump”的前提是“You jump”？

为什么要有这个前提？

google账户的语言设置

2009-04-01T12:29:00.005+08:00

怎样改变我的账户(My Account)和其他一些产品(Gmail等)的界面语言？

部分 Google Web Application 可以单独设置界面语言，如 Analytics, Gmail。但是 Google Account 控制面板和其他一些产品，如 Notebook 并没有提供设置界面语言的选项，但是我们仍然可以修改其语言，只须在访问的时候带上 hl (Help Language) 参数即可。对于部分产品，只须设置一次即可。

设置界面语言为简体中文：

https://www.google.com/accounts/ManageAccount?hl=zh-CN

Set help language as English(United States)

https://www.google.com/accounts/ManageAccount?hl=en-US

PCR引物设计zz

2009-03-30T13:13:00.001+08:00

设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。引物分析软件将试图通过使用每一引物设计变化的预定值在这两个目标间取得平衡。设计引用有一些需要注意的基本原理：

① 引物长度

一般引物长度为18~30碱基。总的说来，决定引物退火温度（Tm值）最重要的因素就是引物的长度。有以下公式可以用于粗略计算引物的退火温度。

在引物长度小于20bp时：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃

在引物长度大于20bp时：62.3℃+0.41℃(%G-C)-500/length-5℃

另外有许多软件也可以对退火温度进行计算，其计算原理会各有不同，因此有时计算出的数值可能会有少量差距。为了优化PCR反应，使用确保退火温度不低于54℃的最短的引物可获得最好的效率和特异性。

总的说来，每增加一个核苷酸引物特异性提高4倍，这样，大多数应用的最短引物长度为18个核苷酸。引物长度的上限并不很重要，主要与反应效率有关。由于熵的原因，引物越长，它退火结合到靶DNA上形成供DNA聚合酶结合的稳定双链模板的速率越小。

② GC含量

一般引物序列中G+C含量一般为40%~60%，一对引物的GC含量和Tm值应该协调。若是引物存在严重的GC倾向或AT倾向则可以在引物5’端加适量的A、T或G、C尾巴。

③ 退火温度

退火温度需要比解链温度低5℃，如果引物碱基数较少，可以适当提高退火温度，这样可以使PCR的特异性增加；如果碱基数较多，那么可以适当减低退火温度，是DNA双链结合。一对引物的退火温度相差4℃～6℃不会影响PCR的产率，但是理想情况下一对引物的退火温度是一样的，可以在55℃～75℃间变化。

④ 避免扩增模板的二级结构区域

选择扩增片段时最好避开模板的二级结构区域。用有关计算机软件可以预测估计目的片段的稳定二级结构，有助于选择模板。实验表明，待扩区域自由能（△G）小于58.6lkJ/mol时，扩增往往不能成功。若不能避开这一区域时，用7-deaza-2’-脱氧GTP取代dGTP对扩增的成功是有帮助的。

⑤ 与靶DNA的错配

当被扩增的靶DNA序列较大的时候，一个引物就有可能与靶DNA的多个地方结合，造成结果中有多个条带出现。这个时候有必要先使用BLAST软件进行检测，网址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/。选择Align two sequences (bl2seq).

⑥ 引物末端

引物3’端是延伸开始的地方，因此要防止错配就从这里开始。3’端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。3′端也不能有形成任何二级结构可能，除在特殊的PCR（AS-PCR）反应中，引物3′端不能发生错配。如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增特异性与效率。

⑦ 引物的二级结构

引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构，这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。若用人工判断，引物自身连续互补碱基不能大于3bp。两引物之间不应该存在互补性，尤应避免3′端的互补重叠以防引物二聚体的形成。一般情况下，一对引物间不应多于4个连续碱基的同源性或互补性。

⑧ 为了下一步操作而产生的不完全匹配

5’端对扩增特异性影响不大，因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5′端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入突变位点、插入与缺失突变序列和引入一启动子序列等。额外的碱基或多或少会影响扩增的效率，还加大引物二聚体形成的几率，但是为了下一步的操作就要作出适当的“牺牲”。

很多时候PCR只是初步克隆，之后我们还需要将目的片段亚克隆到各种载体上，那么就需要在PCR这个步骤为下一步的操作设计额外的碱基。以下总结一些为了亚克隆所要设计的序列。

a 添加限制性内切酶酶切位点

添加酶切位点是将PCR产物进行亚克隆使用得最多的手段。一般酶切位点是六个碱基，另外在酶切位点的5’端还需要加2～3个保护碱基。但是不同的酶需要的保护碱基数目是不相同的，例如：SalⅠ不需要保护碱基，EcoRⅤ需要1个，NotⅠ需要2个，Hind Ⅲ 3个。其中，在原核表达设计引物时还有一些小技巧，大家可以参考：《原核表达之实验前的分析》。里面一些规则是所有表达都通用的。

有一种做法是在进行PCR反应的同时进行酶切，这样就需要注意一些内切酶在PCR反应中的酶切反应率，见附录。不过这种方法虽然方便但并不推荐。有时候，就是把PCR产物回收后酶切再与载体连接效果都不尽理想，同步进行会使出现问题的原因变得更加复杂。一旦出现问题，分析起来更麻烦。

b LIC添加尾巴

LIC的全称是Ligation-Independent cloning，它是Navogen公司专门为其部分的pET载体而发明的一种克隆方法。用LIC 法制备的pET 载体有不互补的12–15 碱基单链粘端，与目的插入片段上相应粘端互补。扩增目的插入片段的引物5'序列要与LIC载体互补。T4 DNA 聚合酶的3'→5'外切活性经短时间即可在插入片段上形成单链粘端。由于只能由制备好的插入片段和载体互相退火形成产物，这种方法非常快速高效，而且为定向克隆。

c 定向TA克隆添加尾巴

在T载体刚出的时候大家都拍手称赞，真是方便，哪个小子脑子这么聪明想出来的。但是后来人们发现TA克隆无法将片段定向克隆到载体中，所以后来Invitrogen推出了可以定向克隆的载体，它的一端含有四个突出的碱基GTGG。因此在PCR引物设计时也要相应的加上与之互补的序列，这样片段就可以“有方向”了。

d In-Fusion克隆方法

这项技术是Clontech还属于BD的时候推出的，2004年在生物通可着实风光了一把，不但当选年度创新试剂还被大家投票为最受大家欢迎的试剂。此技术就其步骤来说是及其方便的，不需连接酶，不需长时间的反应。只要在设计引物的时候引入一段线性化载体两端的序列，然后将PCR产物和线性化的载体加入到含有BSA的In-Fusion酶溶液中，在室温下放置半个小时就可以进行转化了。这种方法特别适合大批量的转化。

这里顺便提一下如果有什么技术给大家留下深刻影响，欢迎大家发email推荐给生物通。说不定你的推荐可以让它成为年度之星呢。

如果要加入额外的碱基总是或多或少会影响到整个PCR反应，比如在加入NotⅠ的酶切位点后整个引物的退火温度就会直线上升（它识别的是8个碱基，且全为GC），这样使另外一个引物的设计变得十分困难，因为一对引物间退火温度相差不宜太远。因此上面提到许多设计原则在实际应用中往往难以做到都符合。在碰到这些情况的时候，我们只能秉着“实践是检验真理的唯一标准”这一原则，要试一试才能知道能否行得通了。

科比

2009-03-16T23:24:00.001+08:00

啥也不说了

让阳光来的更猛烈些吧

2009-03-07T23:45:00.000+08:00

最近这几乎是所有人的心声。

绿巨人《The Incredible Hulk》——有力量并不难

2009-03-07T11:25:00.007+08:00

这个绿巨人，也许叫做无敌浩克更为贴切一些，比起五年前绿色巨人的另外一个版本，要精彩很多，恩，还是不要弄混的比较好。

故事中国防部召集的科学家们，本想利用生化的方法加强人体的战斗力，以期得到超级大兵，却在一个意外中改变了科学家Bruce Banner，或者说创造了神奇的绿色巨人——浩克。

实际上，浩克的诞生是两个科学家的成果——遗传学家Bruce Banner，还有他的女友——细胞生物学家Betty Ross，看起来，拥有这种绿色的神奇力量不是太难，只需要一名做细胞研究的遗传学家，恩，差不多就够了。

后来浩克遇到了很大的问题，他无法控制自己在浩克和Bruce Banner之间的转换，而且在神奇绿巨人的状态下，似乎也没有理智，只有类似低等动物的自我保护和反击的本能。直到发现他的女友拥有能够让他平静下来的另一种力量，我更倾向于是爱情的力量，恩，爱情并不总是让人心潮澎湃，有时候，也能够让失去理智的人，平静下来。

片尾，浩克，或者说Bruce Banner，在加拿大的温带针叶林里，潜心修行，终于能够控制自己的变化和巨大的力量，完成了对自己的救赎。

Bruce Banner一定认为，有力量并不难，困难的是，如何收放自如。

做啥都是做科研

2009-03-06T11:30:00.000+08:00

呵，这个是mpoo说的。

LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤

2009-03-04T14:34:00.003+08:00

24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染实验步骤：

（在生长培养基中直接加入复合物）

1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，将细胞转至24孔板，控制密度使其在转染日密度接近90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。

2.对于每孔细胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培养基稀释1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000试剂。温柔混匀LIPOFECTAMINE 2000，室温温浴5分钟

（在5-25分钟内同稀释的DNA混合。保温时间过长会降低活性。可以批量制备。）

注意：即使LIPOFECTAMINE 2000使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用D-MEM培养。

3.对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。多孔操作可以批量制备。

4.混合稀释的DNA（由第3步）和稀释的LIPOFECTAMINE 2000（由第2步）。在室温保温20分钟。注意：溶液可能会混浊，但不会影响转染。复合物可以在室温保持6小时稳定。

5.直接将复合物（100μl）加入到每孔中，前后（或左右）摇动培养板，轻轻混匀。

注意：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为0.2ml无血清培养基。

6.在37℃，5％的CO2中保温18-48小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。

7.在细胞中加入复合物18-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中（1：10），两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。

（根据个人实验经验有所改动，感谢翻译说明书的原文作者）

今天不在状态

2009-02-25T23:20:00.001+08:00

状态这种东西的确很莫名其妙。

今天没状态的也很莫名其妙。

看书看不进去，paper让人心烦，实验暂时还不用操心。

所以想上一上网，结果猫挂了。

想打个电话吧，结果一直占线。

您拨的电话正在通话中......

唉，这人的运气一背，那就什么都背了。

倒霉的时候怎么办？努力转运！哼！

我摆弄好了那只奄奄一息的猫，用室友的话说，是被我给猥琐的复活了。

所以终于可以来这里散散心。

写完这句话的时候，我突然明白，为什么我要一直折腾那只猫直到它让我上网。

因为，暂时只有这个地方，能够容纳我的空虚。

当生活遭遇命运

2009-02-23T23:10:00.008+08:00

我们照本宣科的生活，所以我们的命运也掩埋在相同的命运里。

——记《The Curious Case of Benjamin Button》

有些人就在河边出生；

有些人被闪电击中过；

有些人对音乐有着非凡的天赋；

有些人是艺术家；

有些人游泳；

有些人懂得纽扣；

有些人知道莎士比亚；

而有些人是母亲；

也有些人能够跳舞；

有些人，注定有不平凡的人生。

就像本杰明-巴顿，在他人生的每个阶段，都与正常人一样，唯一的区别在于这些片段之间，连接的顺序。

如果有一个正常的时间顺序，我们丝毫不会感觉到生活和命运有所冲突，两者是合二为一的，生活就是命运，命运融于生活。正如我们每一个现实中的人们，可曾有谁感觉到命运和生活强烈的冲撞？

那是因为，我们臣服于命运。

事实就是，命运拥有太多的强制力，正如那拖船的船长，愿望是成为一个艺术家，但是他是船员的孩子，正如他父亲所说，他，生来就是要在这个拖船上耗费自己的生命。

他以为自己已经是艺术家，将艺术和自己融为了一体。但是本杰明不经意说出了，他依然只是一个拖船的船长而已。

我们的一生又何尝不是如此。

我们以为自己很聪明，很能干，很了不起。命运不过是我们心中的计划，生活不过是我们的安排。

这只是我们在安慰自己。

抛弃荣誉，忘记财富，把上帝给我们的也会拿走的一切都放在一边，让我们单纯的想一想，我们想要的生活是什么样子？我们的命运又给了我们什么样子的现实？

我们以为自己的生活和命运不会像本杰明一样无法调和，但是事实上，是我们大家都无法让自己的生活和命运和谐统一。既然大家都一样，那么看上去，似乎大家都很幸福，都拥有自己想要的生活。

仅仅是看上去。

也许我们并不希望这样看上去幸福的生活，但是我们没有勇气跳出命运。

是的，我们觉得，就这样也不错，生活安稳，没有波澜。也许我们不知道以后会有什么样的生活，以为将来就是现在的延续，同样的平静安稳；也许我们知道几年之后或者几十年之后，就像走过这条路的前辈们一样，会有这样那样的问题，但是依然觉得，至少我们现在是安稳的，是快乐的，是幸福的，那么多年后的事情，谁说的准呢？也许到时候一切都改观了呢？天无绝人之路，也许会出现另外一条阳关大道呢？

于是，我们享受着命运安排的生活，却似乎没有感觉到自己对命运的屈服。

每一个人期盼的生活，和每一个人面对的命运之间，总是会出现矛盾和冲突，生命并不像表面上看起来那么一帆风顺，如果你也感觉到了，那么也许，你也不会介意，挑战一下命中的注定。

哪怕，仅仅是尝试一下，而已。

幸福是要争取的

2009-02-13T16:46:00.003+08:00

不久之前改的QQ签名，因为看了游龙戏凤。

我等着湖人赢骑士

2009-02-06T19:39:00.001+08:00

恩，做一回标题党

签名20090204

2009-02-04T16:11:00.001+08:00

牛出没注意

“篮球麦加”麦迪逊惨案回顾米勒9秒神奇乔丹两度50+（转载）

2009-02-04T15:47:00.006+08:00

http://sports.sina.com.cn 2009年02月04日12:41 体坛周报

　　特约记者尹晓弟报道

　　纽约的麦迪逊广场花园被称为篮球麦加，每一位球员都以能够在这里写下自己的名字而自豪。也正因为如此，尼克斯队在主场往往就成为他们屠戮的对象。自1968年球馆建立起来，这里发生的“惨案”也数不胜数。

　　首先当属1995年3月29日，这是飞人乔丹第一次复出后重返麦迪逊的首战。是役，身披45号球衣的乔丹37投21中拿下55分。在最后时刻，两队打成111平的时候，还是乔丹成为关键先生。他晃过上来补防的尤因，将球轻巧分给另一侧的中锋温宁顿，后者双手爆扣让公牛队最终2分胜出。55分也创下了麦迪逊广场花园客队球员单场得分的新纪录，这一纪录直到14年后才被科比打破。值得一提的是，这不是乔丹唯一的一次在麦迪逊得分过50。早在1986-87赛季，乔丹就曾经在这里31投15中，罚球22罚20中，一人独得50分，率领公牛108比103击败尼克斯。

　　在乔丹刷新客队球员得分的纪录后11年，2006年12月28日，联盟中终于再次有球员能够在这块篮球圣地单场拿下50分，他的名字叫汉密尔顿。不过和前人相比，汉密尔顿的尴尬在于他能够拿下51分很大一部分原因是这场比赛活塞和尼克斯居然激战了3个加时。

　　2008年的3月5日，小皇帝詹姆斯也在这个场馆书写了自己的历史。詹姆斯全场30投16中，疯狂砍下50分并有10个助攻和8个篮板，率领骑士队119比105大胜尼克斯，纽约球迷在10多年后又一次在篮球麦加见证了另一个传奇23号球员的魔力。

　　当然，麦迪逊广场花园也并非都是客队的福地。在科比之前，保持球馆单场最高得分纪录的就是尼克斯队球员伯纳德·金。在1984年12月25日的比赛中，金全场疯狂掠下60分，只可惜尼克斯队最终还是以114比120输给了同城对手篮网队。在那个赛季，金还以32.9分成为联盟的得分王。

　　最后，我们当然不能不提一个让所有尼克斯队球迷都咬牙切齿的名字——雷吉·米勒。尽管米勒在麦迪逊的单场得分无法和乔丹、科比以及詹姆斯相比，但是他在这里的神奇表演让所有人都难以忘记。

　　最经典的莫过于1995年5月7日的东部半决赛首场，尼克斯队在终场前16秒已经领先6分。但米勒先是在比赛结束前8.9秒抢投三分命中，接着趁着尼克斯队员后场发球不注意抢断成功，再度命中三分将比分扳平。最后时刻，米勒又走上罚球线两罚全中，奇迹般的在不到9秒钟的时间内连得8分，全场比赛拿下38分率领步行者107比105取胜。值得说明的是，一年前，东部决赛的第五场，同样是在这里，米勒在第四节一人独得25分，包括5个三分球率领步行者队翻盘。

奥巴马：史上最牛的老大品牌营销（转载）

2009-02-03T19:19:00.000+08:00

【来源：中国营销传播网】

　　作者：娄向鹏

　　奥巴马，这位美国新一届总统今天（1月20日）正式登基了，成为“世界老大”。

　　做联邦参议员不到四年，没有足够从政经验与可以炫耀政绩的新品牌奥巴马，一开始并不被看好，但是他不仅如愿以偿地当上了总统，而且创造了许多个第一：美国第一个黑人总统，第一个拒绝使用政府提供的公共竞选资金（8400万美元）的总统，还是美国第一个“互联网总统”。

　　美国总统竞选的品牌营销传播与商品的营销传播在本质上别无二致。而美国总统大选是全球无与伦比的顶级营销传播大战，奥巴马能够胜出当选绝不是偶然的，他的成功是一个新生品牌成就行业老大的营销奇迹，奥巴马就是全球最牛的老大营销创新者和践行人，值得我们营销人和企业人好好地借鉴学习。

　　一、洞见社会大势，把握战略机遇。

　　对于饱受共和党政府八年笨拙管治之苦，尤其是被经济危机和海外战争困扰已久的美国民众来说，最渴望就是改变！这是人心所向，“渴求改变”就是美国社会最大的大势！

　　奥巴马不停地对选民说：“我们要的是变革，不能让老一班人马一遍又一遍地玩老一套的政治游戏。”美国的失业率又创新高，数百万户家庭正失去住房。美国的公众非常希望能再出现一个罗斯福或者里根那样的救世主。以全新形象出现的奥巴马极好地把握了选民心理，他所提出经济方案的核心就是维护95％的中产阶级的利益，提出的口号就是帮助他们重拾破碎的美国梦。他提出为年收入在25万美元以下的家庭減税；并为所有儿童提供公费医保；同时增加教育投资，让孩子们都能得到世界一流的教育……他描述的愿景，已经足够点燃绝大多数美国民众的梦想。

　　奥巴马是一个新品牌，他一开始就选择了一个“变革”、“打破传统”的定位，目标直指党内的经验主义和传统路线，树立起变革先锋的崭新形象。

　　真正的老大总是能够洞见社会大势，把握战略机遇的。GE公司的“绿色创想”计划（ecomagination），把握的是环保、保护地球生态的大势；可口可乐推出无糖零度可乐，收购汇源加大非可乐业务比重，是顺应人们追求健康远离碳酸饮料的大势；苹果公司后发居上，推出影音产品如ipod、通讯产品如iphone，是准确地预测并引领新一代电子产品可视化、娱乐化的大势；IBM以服务流程化和服务产品化为目标的转型之路，是捕捉到了用户从维修需求到寻求自动化的解决方案、寻求标准化服务的产品，以保证产品质量稳定的大势。

　　二、鲜明品牌主张，点燃消费能量。

　　当上老大了，似乎无所不能，但是，在坐上老大位子之前、在争坐老大位子之时，即新品牌建立之初必须要有鲜明的品牌主张。

　　何谓鲜明？一是主张必须准确击中目标受众的心中所想所需，激起最强烈的需求欲望，拉够足够的选票，二是做足差异，与人不同，在不同中成就老大。

　　奥巴马在高举变革大旗的同时，与对手做足差异。他把对手麦凯恩与布什的失败政策联系在一起，而自己代表着希望。

　　另一位竞选对手希拉里是个经验主义者，她非常强调自己的经验与老练。

　　事实上，希拉里在克林顿总统第一届任期间，作为医疗改革计划的负责人，进行了近乎教科书般的管理主义实践，是一个十足的传统形象，而奥巴马代表着新生与活力，人们总是爱追求新鲜的东西，无疑，奥巴马更有成效。

　　身材修长、潇洒的他常常登上时装杂志的封面；他总是快步跑上演讲台（与颤颤巍巍的“越战老兵”麦凯恩形成鲜明对照）；入选“美国健美先生”排行榜的他，面对另一位健美先生施瓦辛格的挑衅回应道，“听着，我很瘦，但我很强壮”；在视察军营时，漂亮的三分球将其年轻活力展现得淋漓尽致……

　　奥巴马针对年轻人的表演是贯穿始终的。这不仅表现在他在竞选策略中对年轻人前所未有的重视——他总是首先接见来自学生的代表，他有专门负责学生工作的竞选专家，更在于从一开始，奥巴马就试图向公众传递：“I’m Young Man”的鲜明形象。

　　这一切的一切都使得展现在公众面前的奥巴马激情四射、光彩照人，宛如好莱坞明星一般。而全世界的年轻人对明星都是缺乏免疫力的，更何况连好莱坞明星都是这位年轻的政治明星的拥趸。

　　奥巴马代表了这个时代最“生鲜”最互动最民主的一面，否则NIKE不会选择他的头像作为新款鞋的图纹。真是谁顺应时代，谁就能赢得未来。

　　三、打破市场规则，紧抓蓝海长尾。

　　希拉里，也不仅是希拉里，历届总统竞选都是如此，一直致力于吸引富人，靠大户捐钱为主，不少人已经捐到法律规定的4600美元的上限，这样在选民的质量上好像是高了，但是，大大限制了选民的参与。这就像是红海。

　　奥巴马打破旧的市场规则，吸引大量的青年支持者，他们中间大量从来没有投票的青年，都被奥巴马的竞选团队激活，纷纷支持奥巴马。这就像是蓝海。因此谁赢得青年，赢得选票，谁就能够赢得未来。

　　奥巴马团队充分利用基层本身的力量，发挥各个层次的支持者各自的能耐，在不同的社区开展竞选活动。和以往与竞选人共进晚餐需要花几千块门票不同，奥巴马一些活动的门票只要25块钱，这让普通人也有机会接触到奥巴马。

　　过去美国竞选，候选人都是认准VIP人群，要求的数额都是几十万美元。奥巴马选择不要竞选拨款，而是用他自己的方式筹款。他的支持者组织了很多活动，比如卖几块钱的钥匙扣、T恤衫，就这么几块钱几十块钱，带来一次决定性的竞选。他的竞选被人称为keychaincampaign(钥匙扣竞选)。奥巴马的筹款，大量吸引25美元、50美元的小额捐款，积少成多，后劲强大。

　　当希拉里为竞选捐出500万美元时，奥巴马的竞选班子马上发出消息说，我们也得迅速赶上。不到24小时，人们为奥巴马捐赠了足足800万美元。

　　“这是互联网时代，奥巴马知道经常上网和有时间在网上发表言论的人都不是有钱人，因为有钱人大都没那么多时间，也不会自降身份与穷人一起争论”，一位奥巴马的支持者表示，“选举以支持人数作为评判，奥巴马无疑将获胜。”

　　奥巴马赢得的不仅仅是捐款，更是一张张珍贵的选票，以及伟大的美国梦的传奇。

　　这是最生动最鲜活的长尾营销理论的绝佳实践。

　　四、超越传播屏障，黏住心智资源。

　　当代社会，成功的一半是传播。老大必须先于对手掌握先进的传播手段。

　　“在美国，罗斯福被称为第一个广播电台总统，肯尼迪是第一个电视总统，奥巴马成为了网络总统。”因为他的竞选极大地利用了互联网web2.0的优势，超越传统的传播屏障，吸引了大量的“长尾”和草根力量，并最终获得了成功。他也因此被称为“Web2.0时代的营销大师”。

　　Google公司CEO埃里克则在两年前预言：“能够发挥互联网全部潜力的候选人，将会在下一次总统大选中脱颖而出。”

　　自从2007年2月启动竞选活动以来，奥巴马阵营一直在不停地建设、调整、改进它的技术手段和组织架构，现在，他们拥有了历史上最完善的总统竞选组织手段。

　　除了传统媒体之外，政坛的新鲜人奥巴马非常善于网络的沟通。他知道，网络营销一定不是“谷歌+雅虎”，不是几个弹出的广告，不是“BBS炒作”，而是一系列网络推广手段的整合。

　　他写Blog，上传视频到Youtube，在Facebook有着自己的群组，通过互联网募集竞选捐款。同时，他吸引的年青人纷纷打造着支持奥巴马的主页、发布有关他的BBS帖子、录制拥护他的视频短片。就是这些广泛的Web2.0整合应用使奥巴马冲破了传统媒体的局限与禁锢，他使自己的CHANGE的信念在互联网上遍地开花，冲击着人们的眼球，将草根充分动员发掘，激活了沉默的大多数，收罗到了沉睡的选票。

　　奥巴马真正厉害之处是，他真正掌握了互联网营销的本质。他采取了PULL（拉）的策略，而不是花银子砸的PUSH（推）策略。典型的如“奥巴马女孩”的故事，该视频描述了一位年轻的美女歌手表达自己对民主党总统候选人巴拉克。奥巴马的热爱。“奥巴马女孩”在YouTube的浏览次数超过400万次。奥巴马的竞选团队利用互联网发动了“病毒营销，一封名为《我们为什么支持奥巴马参议员——写给华人朋友的一封信》的邮件到处传播。

　　奥巴马及他的竞选团队深知，web2.0最大的贡献就在于互动，这也是它与传统媒体最大的差别。它通过关系把人们联系在一起分享观点、价值，并进行交流和沟通，形成“让大家告诉大家”、“一传十十传百”的口碑传播。

　　大家广为熟悉的搜索引擎广告也没有被奥巴马忽视。奥巴马购买了Google的“关键字广告”。如果一个美国选民在Google中输入奥巴马的英文名字BarackObama，搜索结果页面的右侧就会出现奥巴马的视频宣传广告以及对竞争对手麦凯恩政策立场的批评等。

　　奥巴马购买的关键字还包括热点话题，如“油价”、“伊拉克战争”和“金融危机”。一搜，即知道奥巴马对这些敏感问题的观点评论，使人们更好的了解这位竞选人

　　奥巴马显然比至今不知道如何上网的麦凯恩更懂得“网”络民心，比IBM式的希拉里更有亲和力。

　　奥巴马的竞选实践大大提升了广告，营销，公关手段的进化和发展，走在了市场营销者的前面。新媒体和数字技术的日益强大和飞速发展，必将使其成为未来传播的领头军。

　　美国总统大选，是当之无愧的全球第一整合营销传播大案，奥巴马是当代营销传播成功的最新典范，其中出现的创新营销理念，最新的技术应用，应当成为营销人和企业人的首选课堂。

一年又一年

2009-02-03T19:14:00.001+08:00

时间每过去一年，就越能体会当年的无知和幼稚

不在服务区

2009-01-09T21:34:00.001+08:00

歌手：陈小春

专辑：独家记忆

公司：环球音乐集团(Universal Music Group)

噢有个女孩说请稍后再拨

爱怎会有把握找不到下落

噢那女孩又说请稍候再拨

唉每当我寂寞你失去联络

你手机怎么啦没法找到你啦

你说它很热啦可能是生病吧

搞不好会爆炸别再打

放过你的幸运号码

我的手不听话

打打打打打再打

噢有个女孩说请稍后再拨

爱怎会有把握找不到下落

噢那女孩又说请稍候再拨

唉每当我寂寞你失去联络

对不起你所拨打的电话

占线没有办法噢

对方不在服务区天吶

就怕听到这一句

我的汗水滴滴达

滴滴达哗啦啦

你是失踪人口吗

我想找警察你在哪

噢有个女孩说请稍后再拨

爱怎会有把握找不到下落

噢那女孩又说请稍候再拨

唉每当我寂寞你失去联络

周末又找不到生日也找不到

情人节找不到端午节才找到

你铃声很吵闹很骚扰

怎么你永远听不到

快疯掉要吃药

烦烦烦烦烦烦恼

噢有个女孩说请稍后再拨

爱怎会有把握找不到下落

噢那女孩又说请稍候再拨

唉每当我寂寞你失去联络

我我很烦怎么办

KOZAK CONSENSUS SEQUENCE

2009-01-07T21:31:00.002+08:00

I.Kozak Sequence
http://www.sciencegateway.org/resources/kozak.htm
Most eukaryotic mRNAs contain a short recognition sequence that greatly facilitate the initial binding of mRNA to the small subunit of the ribosome. The consensus sequence for initiation of translation in vertebrates (also called Kozak sequence) is:

ACCATGG
More general it is:
(GCC)RCCATGG
where R is a purine (A or G).

To improve expression levels, it may be advantageous to design the cloned insert according to Kozak's rules.

References:

Kozak, M. Point mutations define a sequence flanking the AUG initiator codon that modulates translation by eukaryotic ribosomes. Cell. 1986, 44(2):283-92.
Kozak, M. An analysis of 5'-noncoding sequences from 699 vertebrate messenger RNAs. Nucleic Acids Res. 1987, 15(20):8125-48

1。真核mRNA起始密码旁侧的共有序列：
分类共有序列文献
脊椎动物 GCCGCCA/GCC A （+1 ） UGG Kozzak M ,Nucleic Acids ,R es,1 9 87,15:8125

植物 AACAAA A （+1 ） UGGC Kozzak M ,J.Biol Chem,1991,226:8 125Kozzak M ,J.Cell.Biol,1991,115:887

原生动物 A/U A/U A/U A/U A/U A/U --A -- Yamauchi K ,Nucleic Acids A/U A/U A/U--AAA A （+1） UGANRes,1991,19:2715,

Yeast A/U-A-A/U-A A（ +1） UGUCU Cigam A m et al Genes,1987,59:9:1

另外的说法：

KOZAK序列并非基因表达必需的，做载体构建时可以只设计在起始密码子前面引入KOZAK序列，不应该改变起始密码子后的序列。常用的表达载体都有很强的启动子，表达效率不会受影响。

我们常用的Kozak是在ATG前面加上GCCACC

KOZAK是一个女科学家，她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子两端序列为：——G/N-C/N-C/N-ANNATGG——，如GCCACCATGG、GCCATGATGG时，转录和翻译效率最高，特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列，并被应用于表达载体的构建中。

所谓Kozak规则，即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律，若将第一个ATG中的碱基A，T，G分别标为1，2，3位，则Kozak规则可描述如下：

(1)第4位的偏好碱基为G；
(2)ATG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T；
(3)在-3，-6和-9位置，G是偏好碱基；
(4)除-3，-6和-9位，在整个侧翼序列区，C是偏好碱基。

Kozak规则是基于已知数据的统计结果，不见得必须全部满足，一般来说，满足前两项即可

签名 20090101

2009-01-05T14:50:00.000+08:00

奇数年我的运气总是很好

新年快乐～

2009-01-01T10:36:00.000+08:00

09年来啦～哈哈～祝所有人新年快乐～

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终于回来了，感谢～～

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